Закин, Марио Мануел

W УНИВЕРСИТЕТ В БУЕНОС ЕЙРС ФАКУЛТЕТ ПО ТОЧНИ И ПРИРОДНИ НАУКИ 110 n от едно от фиксирането на oogglementqinmigganancia или immunocmmatogggia g изследване на вируса отидете на re Mario Mama]. Резюме на тезата на Закин 1963 година

дестилирана вода

UNIVERSIDAD DE-BUBNOS AIRES ФАКУЛТЕТ ПО ТОЧНИ И ПРИРОДНИ НАУКИ Приложение dg gg t6c3 gaa de tljggión do cggnlcnonto 1nnnnorluo ggggggcig и имунохронатосггия към изследването на вируса до ла отпадъците grcigg

Спонсор на дипломната работа: д-р Освалдо А. Песо

насочете ÉES Y METONS le le 1) mguoreecemil e) Antigenoedricee Органи на заразените животни в природата]. и експериментално чума по свинете. A Уроците, използвани в le prinre. част от опита идва от заразено експериментално енимеле и чумното кино за мир. ако към енилелеята, отнасяща се до еоепехоевия крак, тези последни органи са били емиедое от различна държава. точки За втората поредица от учения и инфекции бяха прасета от 25 и 30 кг с 2 1. iqyeotedos eubeutáneemente. на 17 суспензия на свински чума вирус LM13, използван: като материал за изтегляне в Laboratoriosmi. Enimlee беше жертвано между третия и осмия ден след заразяването и бе събрана целувка. ганглий и бъбрек. б) серуми и глобалина А - серум от хипериннма на чума по свинете. получени чрез инокулация на вирулентен дефибрин при свине, които вече са имали определен предишен имунитет. aea чрез ваксинация, .виж по болест. Серумът е предоставен на Fuerte Sancti Spiritu Laboratories. // 9

B - Suoro do antiporoino заек, получен чрез последователно инокулиране. с начо или рамо, с дози нормален свински серум. Дневните дози варират от 0,1 до 0,2 1, а броят на инокулациите е 16, прилагани за период от година и половина. При първото инокулиране се използват маслините на Freund в съотношение 2 към 1 според адюванта. Титрите, получени чрез модифициране на токсичността на проепитин, варират между 1/12800 и цялата четна. всяко животно беше следното: Inoo. nl m1 N 'нат. Freund vi t1 m90 прави инокулация 1-ви. 1-ви. 2 ac x) 2 0 1 '1P (x) 1 банан след 3 0. 1 o 1n (m) 2 an 4 O. 1 - o 2 nn 5 0.1-1p 3 nn 6 Q. 1 - m 2 nn 7 0.1 oo 2 a 8 0.15-1p 3 a 9 0. 15-13 2 nn 10 Oo15 - o 2 a 11 0.15 или 1p 3 nn 12 0.15-1! 2 n n 13 0,15 o o 2 n n 14 Oo2-1p 3 n n 15 0,2 c 1m 2 n n 16 0. 2 o e 2 u n (x) ao - euboutánnu (zz) 1p a intraporitonoal (xxx) 1. - intranusoulor llo

при стайна температура и след това се концентрира, два слоя от утайката. 11. - пречистване чрез преминаване през DEAЕцелулозна колона. според техническия ds Courtsin (28). DEAEцелулозата, след като се измие и доведе до рН 6, се суспендира в 0,02 М буфер, рН 6 (фосфатен буфер). докато конюгираното вещество. за пречистване. той беше диализиран за една нощ срещу 1 същия ауспух. Пречистената фракция от интерес. Той се разрежда с 0,02 MpH 6 буфер, докато примесите се елиминират от колоната с pH 5,2 буфер, описан по-рано. Течността се концентрира до първоначалния обем чрез диализа срещу Carbowax 20 M. I - Нормален свински серум. получени от леохони от стада, свободни от чума по свинете. и неваксинирани. o) Разтвори и реактиви A- CIN.oososaoso сода-cos фосфат физиологичен разтвор. 801 8 P0HI. 0 0,00,0. - 2048 4 2 2 Дестилирана вода esp. PH 7-8 "811 B - буфер карбонатобиокарбон до 1000 ml oooooooooooooooooo ÜO3HNh 0.000.000.00000000 Agus дестилирана капачка. 400 m1 PH 9 G // 17

в - Буфер за диализа на конюгирания протеин cocoootneoe100.00.00.000032 g eeeoeeeeeeeeeeo 7.2g Aguad'atilad. качулка. o.u40 0,1 PH 7 D - веронален буфер за вероналсодиева електрофореза. 7,33 g натриев ацетат. 01H0.1N. 4,86 g 45ll Дестилирана вода osp. 750m1 ph 8.6 E o Реагенти, използвани в модифицираното методооолорно трио на Кох и Малбекин (1924): - Разтвор за смилане: 5% разтворът на меден сулфат се смесва със 100 ml концентрирана и чиста сярна киселина. Полученият разтвор се излива внимателно в 100 ml дестилирана вода. Контролен разтвор на амониев сулфат: 9.4332 g чист моника сулфат и сео се разтварят през 3043! 0,2 N за завършване на 1000 m1. Разтворът 80 32 0,2 ​​N се получава чрез разтваряне на 5,6 1 концентрирана киселина във вода до получаване на 1000 ml. Този концентриран разтвор съдържа 2 ul R на nl и е необходимо да се разрежда, за да се използва като контрола.Вода в 20 nl (40 mg N) концентриран разтвор на амониев сулфат. Добавят се 180 nl SO4H20.2N и се допълва до един литър с дестилирана вода. Всеки ml от този разтвор съответства на 0,04 Ig от I. // 18

- Реактив на Нийлер: 22,5 g йод се разтварят в 20 nl ана, съдържащи 30-5 IK. След като разтварянето завърши, бяха добавени 30 g Hgmetallic и това беше добре направено, като се избягва смесването му горещо, охлаждане в задния ток. Разбъркването продължи, докато цветът на самия йод изчезне. Супернатантната течност се декантира и реакцията се тества срещу разтвор на нишесте. Когато реакцията е отрицателна. реагентът е излязъл живак. затова той добави няколко капки йод със същата предишна концентрация. Добавя се йод до леко положителна реакция срещу нишестето. Разтворът се разрежда с вода до пълни обеми на OHNeal lofil Buffere използва 200 ml и след това се смесва с два в колонна хроматография или фосфатен буфер 0,2 MpH 6,3: 387 ml 0,2MPOHN 4 2 (A) се стопява с 112,5 ml от 0,2 до 204 HN32 (В); По този начин имахме 0,2 М фосфатен буфер с рН 6,3. От яде. Разтворът отнема 100 ul и се добавят 1040 ml дестилирана вода. фосфатният буфер 0,0175 MpH 6.3. - Фосфатен буфер 0,02 MpH 6: ако се получи 877 nl (A), те се смесват с 123 ml (B), като се получава фосфатен буфер 0,2 H ph 6. Разреждане на 100 1 и 1000 ll с дестилирана вода и се получава буферът 0t02 l ph 6. // 19