Молекулярна хетерогенност и прогностични последици от напреднала колоректална неоплазия
Субекти
Тази статия е актуализирана
Обобщение
Заден план:
Не е сигурно дали синхронните колоректални ракови заболявания (S-CRC) се развиват преференциално чрез генерализирано ДНК метилиране и дали имат по-лоша прогноза от единичната CRC. Тъй като туморите на микросателитната нестабилност (MSI) могат да объркат ефекта на метилирането на S-CRC върху резултата, ние разгледахме този проблем в поредица от CRC, характеризиращи се с BRAF и MS статус.
Методи:
Демографията, клиникопатологичните записи и специфичната за заболяването преживяемост (DSS) бяха оценени в 881 последователно резецирани CRC и бяха подложени на пълна колоноскопия. Всички тумори са типизирани за BRAF c.1799T> Мутация и MS статус, последвано от търсенето на мутация на зародишна линия при пациенти с MSI CRC.
Резултати:
Синхронните колоректални ракови заболявания (50/881, 5,7%) са свързани с CRS на стадий IV на микросателитен (MSS) (19/205, 9,3%, P = 0,001) и с HNPCC (9/32, 28%, P c. 1799T> Една мутация (HR 2,16; 95% CI 1,25–3,73; P = 0,01) са независими от етапа предиктори на смъртта от MSS CRC. Специфичната за заболяването преживяемост на пациенти с MSI MRI не е засегната от S-CRC (HR 0,74, 95% CI 0,09 до 5,75, P = 0,77).
Завършеност:
Стабилните микросателитни CRC имат по-лоша прогноза, ако се диагностицира S-CRC или синхронен напреднал аденом. Появата и повишената агресивност на синхронната напреднала неоплазия на SMS не са свързани с BRAF мутацията .
Главен
Два или повече първични колоректални карциноми се откриват при 2 до 5% от всички новодиагностицирани пациенти с колоректален рак (CRC) (Adloff et al, 1989; Passman et al, 1996; Chen and Sheen-Chen, 2000; Oya et al, 2003; Papadopoulos et al, 2004; Latournerie et al, 2008; Nosho et al, 2009; Mulder et al, 2011). Признаването на синхронния колоректален рак (S-CRC) като клинична единица повиши осведомеността, че точното периоперативно изследване на цялото дебело черво е задължително при пациенти, подложени на резекция на CRC. Остава обаче несигурно дали S-CRC има различни прогностични и молекулярни характеристики от единичния CRC.
Проучванията за контрол на случаите, изследващи характеристиките и резултатите на пациентите със S-CRC, са дали противоречиви резултати. Мъжки пол (Oya et al, 2003; Latournerie et al, 2008; Mulder et al, 2011), старост (Passman et al, 1996; Papadopoulos et al, 2004; Wang et al, 2004; Mulder et al, 2011), съжителстващи аденоми (Chen and Sheen-Chen, 2000; Latournerie et al, 2008) и по-лошо оцеляване (Oya et al, 2003; Nosho et al, 2009; Mulder et al, 2011) са свързани със S-CRC в някои серии, но не и в други. Тези несъответствия вероятно ще отразят пристрастия при избора на индекси, както и при назначаването на контроли с единични CRC. По-специално, различни серии могат да имат променлива честота на ракови заболявания с микросателитна нестабилност (MSI), които са свързани с множество лезии (Pedroni et al, 1999; Dykes et al, 2003; Nosho et al, 2009; Bae et al, 2012), но и с по-добра прогноза (Gryfe et al, 2000; Malesci et al, 2007).
Предвид сложните взаимодействия между резултата и различните молекулярни профили, очевидно е, че прогностичното значение на S-CRC може безопасно да бъде оценено само чрез анализ на уникални молекулярни подгрупи на CRC. Освен това анализът трябва да бъде разширен до синхронни напреднали аденоми, които също са свързани с метахронен CRC (Moon et al, 2010). Ретроспективно търсене на синхронни аденоми или S-CRC беше извършено в регистрите на периоперативни колоноскопии, извършени при 881 последователни пациенти, чиито резецирани CRC първоначално бяха класифицирани в молекулни подкласове въз основа на микросателитния статус и BRAF. След това бяха оценени клиникопатологичните характеристики и резултатите от пациентите с напреднала синхронна неоплазия.
Материали и методи
Изследване на популацията и подгрупите на CRC поради синхронна неоплазия
Целта на проучването е да включи 1000 последователни пациенти, претърпели резекционна операция за CRC в клиниката и изследователския център на Humanitas между 2 февруари 1998 г. и 6 април 2006 г. Критериите за изключване бяха ограничени до следното: (1) липса на субмукозна инвазия в патология; (2) анастомотичен рецидив на резециран преди това колоректален тумор; (3) диагностика на фамилна аденоматозна полипоза; (4) CRC, свързана с възпалително заболяване на червата. Протоколът е одобрен от Комитета по етика на институцията и информираното съгласие на пациентите относно лечението на техните лични данни е получено от препращащия лекар или от други клиницисти, участващи в проучването. При предварителния анализ на записите 119 пациенти (нито един от които със S-CRC) са изключени поради непълна или некачествена периоперативна колоноскопия, което води до окончателна популация от 881 субекта.
Подтип на молекулярния тумор
Проби от тумор от всички пациенти и всички видове рак от пациенти с S-CRC бяха изследвани за MSI. BAT-26 мононуклеотид и BAT-25 мононуклеотид при пациенти, отговарящи на критериите Амстердам II и/или критериите Bethesda (n = 279), бяха използвани като молекулярни маркери на MSI (Hatch et al, 2005; Laghi et al, 2008). ДНК е получена от вградени в парафин участъци от тумори, съдържащи най-малко 50% туморни клетки или от микродисекции на тумори. Локусите BAT-25 и BAT-26 се амплифицират с флуоресцеинови праймери и се анализират чрез капилярна гел електрофореза (ABI PRISM 310 Genetic Analyzer, Applied Biosystems, Монца, Италия) (Aaltonen et al., 1998; Malesci et al., 2007).
Във всички MSI CRC, дефект в възстановяването на несъответствие (MMR) се оценява чрез липсата на ядрена експресия на hMLH1 (клон G-168-15, BD Bio Sciences, Buccinasco, Милано, Италия), hMSH2 (клон FE11, Calbiochem, Merk Millipore, Darmstadt, Германия) или hMSH6 (клон 44, BD Bio Sciences) в имунохистохимията (Truninger et al, 2005). Експресията на несъответстващия възстановителен протеин също е проверена при MSS тумори на пациенти, отговарящи на критериите от Амстердам (n = 10). Пациентите с MSI CRC са подложени на генетично тестване на зародишна линия за мутации на MLH1, MSH2 и MSH6 чрез секвениране на дефекти на MMR при първичен рак (Wahlberg et al, 2002). Амплификационен анализ на сондата за многократно лигиране (probemix SALSA MLPA P003 MLH1-MSH2, probemix P248 MLH1-MSH2, probemix P072 MSH6, Медицински изследователски съвет-Холандия, Амстердам, Холандия) е извършен при пациенти с отрицателна мутация.