Количествено определяне на свободния пролин в диетата на говедата meliponícola в провинциите Matanzas и
1 Експериментална станция за пасища и фуражи Индио Хатуей, Университет в Матанзас, Министерство на висшето образование. Central España Republicana, CP 44280, Matanzas, Куба.
2 Фармацевтичен факултет, Катедра по хранене и хроматология, Университет в Саламанка, Испания.
3 Катедра по ботаника и физиология на растенията, Университет в Саламанка, Испания
Ключови думи: аминокиселини; пчелен мед; прашец.
Ключови думи: аминокиселини; пчелен мед; прашец
В Куба добитъкът meliponícola се състои от всички управлявани кошери, принадлежащи към вида Melipona beecheii Bennett, 1831 (Apidae: Meliponini), регистрирани или не (Lóriga, 2015). Както във всяко друго стадо, жизненоважно е да се поддържа здравето на животните чрез действието на защитните механизми (колективни и индивидуални), осигурени от имунната система.
При пчелите тази система се състои от клетъчни и хуморални компоненти (Bulet et al., 1999). Клетъчните защитни механизми са медиирани от хемоцити, които се намират в хемолимфата и са особено въвлечени във фагоцитозата и капсулирането (Chapman, 2013). Хуморалният отговор включва синтеза на антимикробни пептиди, които действат в отговор на инфекции, произведени от бактерии, гъбички и паразити (Gätschenberger et al., 2013).
Според Gutiérrez and Orduz (2003), сред най-изследваните антимикробни пептиди е абаецинът, присъстващ в хемолимфата на пчелите, съставен от между 34 и 39 аминокиселини. Пролинът, който се откроява сред тези аминокиселини, има подчертана антимикробна активност срещу грам положителни и грам отрицателни бактерии.
За да функционират, биологичните системи се нуждаят от хранителни елементи, които идват от набор от храни, доставяни чрез диетата. При пчелите те съответстват главно на цветен прашец и нектар (Brodschneider и Crailsheim, 2010). И двете са от жизненоважно значение за имунната система на тези насекоми (Di Pasquale et al., 2013).
Въз основа на горното, поради важността на приноса на тази аминокиселина в диетата на пчелите за правилното функциониране на тяхната имунна система, тази работа има за цел да определи количеството свободен пролин, присъстващ в консумираната храна (прашец и мед ) от мелипоникола говеда в провинциите Матанзас и Маябеке.
Материали и методи
Местоположение. Изследването е проведено в два мелипонария. Единият се намира в района на Пасторита, община Матанзас, в провинция Матанзас, а другият е разположен в района на Северния популярен съвет на община Сан Николас, в Маябеке.
Проби Случайно бяха избрани 10 кошера, по пет във всеки сценарий. В Mayabeque бяха избрани кошери 14, 2, 48, 5 и 6. В Matanzas бяха избрани кошери 1, 9, 11, 12 и 13. Във всеки от кошерите 60 g прашец на мелипоникола и 80 ml мед. Вземането на проби е извършено през април 2018 г.
Калибрационна крива. Установено е чрез използване на пролинови стандарти с различна концентрация, подложени на същия процес, посочен за пробите. Кривата на калибриране е разработена с данните за абсорбцията на стандартите от различните концентрации на пролин и е намерено уравнението на калибрационната линия.
Определяне на свободния пролин в меда. 2,5 g хомогенизиран мед се претеглят с точност до 0,1 mg. Те бяха разтворени във вода с помощта на магнитната бъркалка. След това те се прехвърлят в 5 ml мерителна колба и разтворът се долива до маркировката. Впоследствие се вземат 0,5 ml и се добавят 0,25 ml 98% мравчена киселина (H-COOH) от доставчика на лабораторни материали PROLABO и 1 ml 3% разтвор на нинхидрин. По същия начин се приготвя заготовка, в която работният разтвор се заменя с 0,5 ml дестилирана вода. Впоследствие епруветките бяха затворени, разклатени и държани в продължение на 15 минути във вряща водна баня. След като този процес приключи, те се изваждат от горещата вода и се оставят да се охладят до стайна температура за 5 минути. Добавят се 5 ml от разтвора на изопропанол-вода и се разбърква енергично. И накрая, абсорбцията беше измерена при 517 nm по отношение на заготовката, която също беше обработена през 35-те минути, следващи охлаждането.
Изчисления и изразяване на резултатите. Ако C е µg/ml пролин, получен от калибрационната крива, а P (g) е теглото на меда, който е използван в анализираната проба, ще е необходимо да:
mg/kg мед = 5C/P
Определяне на пролин в цветен прашец. Свободните аминокиселини бяха извлечени. За целта те се претеглят с точност от приблизително 0,1 mg, добавят се 0,25 g цветен прашец на meliponícola и 25 ml 80% етанол. Впоследствие, в продължение на 30 секунди, разтворът се разбива със соникатора. След това те бяха подложени на разбъркване в продължение на 15 минути, преди да се пристъпи към центрофугиране (5 минути при 10 000 rpm) и декантиране на супернатантата. Тази процедура на екстракция беше извършена още два пъти върху утайката. Полученият етанолов екстракт се довежда до сухо в ротационен изпарител, без да надвишава 40 ° С. След това остатъкът се суспендира отново в ултрачиста вода и се долива до 25 ml. За неговото филтриране са използвани 0,45 микрона милипорни филтри. Накрая се вземат 0,5 ml от филтрата и се процедира както при определянето в мед.