Центрифугаци; н

Центрофугирането е техника на утаяване, ускорена благодарение на използването на центробежна сила. Прилага се за анализ или разделяне на смеси от частици, клетки, органели или молекули.

Теория на центрофугирането и количествени аспекти: виж Luque, стр.123 или Freifelder, стр.298.

Инструментална

1. Тръби

Изработени от стъкло или пластмаса. Химически устойчив (разтворители, реактиви) и физически (опън при използваните високи скорости). Различни размери и форми. Специални пластмаси за високи скорости.

2. Центрофуги

Можете да регулирате скоростта, времето, температурата. Високи скорости (10 2 -10 5 об/мин).

3. Ротори

Два вида:	ъглов или фиксиран ъглов ротор	люлеещ се ротор

Условия

Според скоростта:

Приблизителен критерий:
Нискоскоростно центрофугиране	по-малко от 10 000 оборота в минута
Високоскоростно центрофугиране	между 10 000 и 20 000 оборота в минута
Ултрацентрифугиране	повече от 20 000 оборота в минута

Според целта:

1. Аналитично центрофугиране

Целете се: измерва физическите свойства на частиците, които се утаяват, като коефициента им на утаяване или молекулната им маса. Особено във варианта ултрацентрифугиране аналитика.

Молекулите се наблюдават чрез оптична система по време на центрофугиране. Епруветките за центрофугиране трябва да бъдат кварцови, за да могат да преминават видима и ултравиолетова светлина. Накланящ се ротор, вертикално наблюдение.

2. Подготвително центрофугиране

Най-често използвани. Целете се: изолира частици, клетки или молекули за анализ или по-късна употреба. Като цяло се използва по-голямо количество проба, отколкото в аналитиката.

В зависимост от средата, в която се центрофугира и начина на нанасяне на пробата:

1. Диференциално центрофугиране

(Нарича се още мобилна граница). Епруветката се пълни с проба и се центрофугира. Поведението на всеки компонент на пробата зависи от неговата форма, размер, плътност и, логично, за условията на центрофугиране. Получават се само 2 фракции: утайка и супернатант.

[Забележка: думата утайка е по-подходяща за нещо неразтворимо, което се утаява чрез центрофугиране или по други механизми (например химическа реакция); утайка по-правилно е за това, което е било принудено да стигне до дъното, но все пак би било разтворимо; pellet е английска дума за това, което се уплътнява на дъното в резултат на центрофугиране]

A ап типично е субклетъчно фракциониране (разделяне на различните компоненти на клетката, главно органелите) (вж. Luque или Alberts) с помощта на последователни центрофугирания с нарастваща скорост.

2. Центрофугиране със зонална или скорост на утаяване

Пробата се нанася на тънък слой върху центрофугиращата среда, която е градиент на плътността. При центробежна сила частиците се утаяват през градиента, концентрирайки се в отделни зони или ленти. Вашата скорост напред (и следователно механизмът за разделяне) зависи от неговия размер, форма и плътност; всички тези параметри се комбинират в коефициента на утаяване,

`" Коефициент на утаяване "= s = (" скорост на утаяване ")/(" центробежно ускорение ")`

което се измерва в svedberg единици (1 С = 10 −13 секунди).

Центрофугирането трябва да приключи преди някоя от отделените частици да достигне дъното на тръбата. Отделните компоненти се събират поотделно чрез много внимателно аспириране на различните ленти или, по-добре, чрез пробиване на дъното на тръбата и събиране на фракции течността, която пада.

Може да се види анимация на раздялата.

Градиентът на плътността се създава чрез градиент на концентрация: увеличаване на концентрациите, слизане по тръбата, на подходящ компонент. За това се използват захароза, цезиев хлорид, албумин, говежди серум на плода. или търговски среди като Ficoll - синтетичен полизахарид -, Percoll, метризамид.

Можете да подготвите:
още прекъснат градиент или на стъпки, ръчно
б) а непрекъснат градиент, с помощта на устройство за образуване на градиент

---