Сигнализирането на tgf-β gbb, индуцирано от диета с високо съдържание на мазнини, предизвиква резистентност към

tgf-β

  • Субекти
  • Обобщение
  • Въведение
  • Резултати
  • Индукция на израза на gbb имитира HFD фенотипове в Дрозофила
  • Инхибирането на Gbb сигнализиране спасява индуцирано от HFD затлъстяване и диабетични фенотипове
  • трибъл е цел надолу по веригата на Gbb сигнализация
  • трибъл регулира отрицателно инсулиновата сигнализация
  • на инхибиране на трибъл потиска предизвиканото от затлъстяването gbb и диабетичния фенотип
  • Дискусия
  • Материали и методи
  • Drosophila melanogaster запаси
  • Клетъчна култура, стимулация и трансфекция.
  • HFD и мощност
  • Измерване на телесното ниво на TG
  • Измерване на нивото на трехалоза/глюкоза в хемолимфата
  • Пречистване на РНК и количествен RT-PCR анализ
  • Култура ex vivo на мазнини за възрастни тела
  • Western blot и имунооцветяване
  • Чип
  • Анализ на луцифераза в клетките Дрозофила S2
  • статистически анализ
  • Допълнителна информация
  • Допълнителна информация
  • PDF файлове
  • Допълнителна информация
  • Коментари

Субекти

Обобщение

Въведение

Мухите, хранени с HFD, показват ненормални нива на глюкоза и липиди и инсулинова резистентност, подобна на тази, наблюдавана при затлъстели бозайници. HFD-индуцираната инсулинова резистентност се медиира от активността на племенния път на Gbb в мастното тяло. Следователно целенасоченото инхибиране на племенната сигнализация на Gbb представлява нова терапевтична стратегия за лечение на затлъстяване и свързаните с него метаболитни заболявания.

Резултати

Индукцията на експресия на gbb имитира HFD фенотипове при дрозофила

На 14-ия ден от HFD измерихме нивата на експресия на седем лиганди от суперсемейство TGF-β в мастното тяло на възрастната муха. От факторите, които тествахме, само експресията на gbb се увеличи значително чрез HFD хранене (фиг. 1А), особено в мастното тяло (фигура S2A). След това изследвахме дали gbb може да промени нивата на TG в мастното тяло и трехалоза/глюкоза в хемолимфата. Свръхекспресията на gbb в тялото на възрастни мазнини (DCG> gbb) повишава нивата на TG и трехалоза/глюкоза в сравнение с тези на контролните мухи (DCG-Gal4/+) (фиг. 1В). Въпреки това, свръхекспресията на gbb в червата (NP3084> gbb) или в мускула (MHC> gbb) не променя нивото на TG (Фигура S2B). Освен това нивото на pAKT е значително намалено в gbb, получено от мазнини (DCG> gbb), но не и в gbb, получено от червата или мускулите (Фигура S2C).

Свръхекспресията на gbb в тялото на възрастни мазнини (pS106 GS> gbb + RU) значително повишава експресията на Dilp2 и леко увеличава експресията на Dilp3 и Dilp5 по отношение на нивата в контролите -RU (фиг. 1E). За да определим дали gbb регулира инсулиновата сигнализация, ние дисектирахме мастното тяло на възрастни мухи pS106 GS> gbb + RU или -RU и ги лекувахме с инсулин ex vivo (Фигура S2E). В контролите на -RU, лечението с инсулин ex vivo повишава нивото на pAKT спрямо нивото на необработените проби. Напротив, в проби, получени от мухи + RU, които свръхекспресират gbb в тялото на възрастни мазнини, лечението с ex vivo инсулин не повишава нивото на pAKT (фиг. 1F).

За по-нататъшно изследване на регулирането на инсулиновата сигнализация чрез gbb, ние изследвахме субклетъчната локализация на dFOXO в мастните тела на ларвите, използвайки специфичния контролер на мастните тела DCG-Gal4. В тези експерименти, разчленените мастни тела бяха серум гладни и третирани с човешки инсулин ех vivo. В контрола на глада DCG-Gal4 и DCG> gbb мастните тела, dFOXO е локализиран главно в ядрата (фиг. 1G, I). След инсулинова стимулация почти целият протеин dFOXO е преместен в цитоплазмата в контролните мастни тела DCG-Gal4 (фиг. 1Н), докато в мастните тела DCG> gbb по-голямата част от протеина dFOXO все още е в ядра (фиг. 1J). Тези резултати показват, че свръхекспресията на gbb в мастното тяло инхибира инсулиновата сигнализация, което води до инсулиноустойчив фенотип, подобен на този, наблюдаван при дългосрочно HFD хранене.

Инхибирането на Gbb сигнализиране спасява индуцирано от HFD затлъстяване и диабетични фенотипове

( ДА СЕ ) Нивата на триглицеридите и трехалозата/глюкозата в pS106 GS> trb + RU се повишават спрямо тези на контролите −RU. ( Б. ) При HFD, спадът на trb в мастното тяло потиска повишените нива на триглицериди и трехалоза/глюкоза. ( ° С, д ) Елиминирането на trb в мастното тяло, което свръхекспресира gbb (pS106 GS> gbb + trb RNAi + RU), потиска повишените нива на триглицериди и трехалоза/глюкоза, наблюдавани при pS106 GS> gbb + RU. Данните са представени като средно ± sem от поне три независими експеримента. * P 4, 5, което от своя страна причинява вторични заболявания като инсулинова резистентност 6. В това проучване ние демонстрираме, че индуцираното от HFD затлъстяване задейства TGF-β сигнализиране, което понижава регулирането на инсулиновата сигнализация в мастното тяло. Ние също така демонстрираме ролята на трибъл, нова цел на сигнализирането на TGF-β/Gbb, за развитието на инсулинова резистентност.