Методи за класификация на дрождите на Urbina Wines Blog
Понеделник, 3 януари 2011 г.
Методи за класификация на дрождите
ХАРАКТЕРИСТИКИ, ИЗПОЛЗВАНИ ПРИ КЛАСИФИКАЦИЯТА НА Дрождите
- Микроскопски вид на клетките.
- Режим на сексуално възпроизвеждане.
- Физиологични характеристики (особено хранителни).
- Биохимични характеристики.
- Сравнение на геноми чрез повторно асоцииране на ДНК-ДНК или ДНК-РНК
Таксономия: Проучване за класификация и идентификация.
Класификация: Групиране на организмите в таксони (таксони) според сходствата или връзките на техните предци, или и двете.
Идентификация: Сравнение между неизвестен щам и подобен известен.
Номенклатура: Името на приетите таксони.
МИКРОСКОПСКИ АСПЕКТ
Размер на клетката.
Форма: Формата на клетките показва режим на вегетативно размножаване.
Образуване на нишки
Полово размножаване Структура и форма на аскоспорите и телиоспорите
ФИЗИОЛОГИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Способност за ферментация на определени захари (тест за ферментация).
Аеробен растеж с различни съединения (тестове за асимилация), като всеки единствен източник на въглерод или азот.
Ексцизия на арбутин.
ТЕХНОЛОГИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Изследване на ферментационната сила.
Инкубационната температура за тестове на таксономия е 25 ° C, въпреки че оптималната за някои дрожди е по-висока, а за други по-ниска.
МЕТОДИ ЗА КЛАСИФИКАЦИЯ НА ДРЕЖДИТЕ
Метод: Спорообразуването се причинява от култивирането на дрождите в благоприятна среда (предспороносна среда), богата на глюкоза, в която те остават за период от 48 часа при 28 ° С. След това време те се засяват в спороносна среда (спорообразуваща среда), бедна на глюкоза, за да се намали вегетативното възпроизводство възможно най-много и допълнени с вещество, индуциращо спорообразуване като ацетат. В последната среда те ще се съхраняват в продължение на 3 до 5 дни при температура 25 ° C. След този инкубационен период се правят пресни препарати, последвани от микроскопско наблюдение, като се отбелязва наличието или отсъствието на спори, както и техния размер. За да се улесни това наблюдение, в съмнителни случаи може да се направи оцветяване на спори.
В случай на отрицателно спороносене, културите се държат на стайна температура и се изследват ежеседмично в продължение на минимум 4 до 6 седмици.
Състав на медиите:
Преспорулационна среда
Глюкоза 50 g
Екстракт от мая 10 g
Хранителен бульон (Difco) 30 g
Калиев ацетат
Агар 20гр
Вода 1000 мл
Спорифицираща среда:
Глюкоза 1 g
Екстракт от мая 2.5 g
Хранителен бульон (Difco)
Калиев ацетат 9,8 g
Агар 20гр
Вода 1000 мл
Преди тръби средата трябва да се разтопи, тъй като съдържа агар.
Стерилизацията на средата се извършва в автоклав, една атмосфера за 15 минути.
Ферментационната мощност е мярката за процента (V/V) етанол, който щамът на дрождите е способен да произведе.
Този тест първоначално е разработен от Hayduck и описан от Hericstoth и Osztrovsky през 1927 г. Той се основава на определянето чрез загуба на тегло на въглеродния диоксид, който се отделя по време на алкохолна ферментация, съгласно стехиометричното уравнение:
C2H12 06 ——-———— 2 CO2 + 2 CH3-CH2OH
Метод: За да се определи ферментационната сила, 12º гроздова мъст от боме се приготвя от концентрирана мъст, като рН се регулира до 5 с разтвори на натриев хидроксид или солна киселина.
Така приготвената среда се разпределя в 100 ml колби на Erlenmeyer. вместимост, като във всяка се поставят 50 ml среда. Те се стерилизират в автоклав при 121 ° С за 15 минути.
Сеитбата се извършва с платинена дръжка от млади култури, след като мъстта се засее, колбите се затварят с гумени запушалки, снабдени с клапани на Мюлер с концентрирана сярна киселина. Тези клапани позволяват излизането на въглеродния диоксид и предотвратяват навлизането на въздух.
След сеитбата колбите се претеглят и се инкубират при 25 ° С. до постоянно тегло.
Получената разлика в теглото в края на процеса ще показва отделения въглероден диоксид, който умножен по установен коефициент директно дава стойността на етанола, образуван като процент (V/V).
Изчисляване на фактора:
При ферментация на 180 g глюкоза те произвеждат 88 g въглероден диоксид и 92 етанол; следователно един грам СО2 съответства на 1,04 г етанол. Тъй като плътността на етанола е 0,79, 1,04 g съответства на обем 1,3 ce Следователно 1 g CO2 съответства на 1,3 ce етанол.
Разликата в теглото в грамове, умножена по 1,3, дава обема на произведения етанол.
Обем на брада ———————— 1,3 х загуба на тегло = g етанол
100 ———————————————— PF
Обемът на мъстта е 50 ml. скоро:
PF = 100 х 1,3 х загуба на тегло в грамове: 50
P.F. = 2,6 х загуба на тегло в грамове.
На практика се умножава по 2,5, тъй като добивът не е 100.
Резултатът от този тест предоставя важна информация за идентичността на щама, който се изследва.
Таксономистите не разглеждат този тест, но в Института по индустриални ферментации се забелязва, че този тест бързо определя рода и в него, в някои случаи от рода Saccharomyces позволява да се прави разлика между различните видове. Невключването на този тест може да се дължи на факта, че гроздовата мъст не е основно източникът на изследване на дрожди, както се е случило в този институт почти от неговия произход.
ФОРМИРАНЕ НА ПСЕВДОМИЦЕЛИАРНИ КЛОНОВЕ
Метод: Абсорбираща хартия се поставя в чаша на Петри, а отгоре се поставя огъната стъклена пръчка, върху която се поставя пързалка. Комплектът се стерилизира във фурна при температура 120 ° С за 3 часа. Веднъж стерилни и работещи при асептични условия, няколко капки стерилен разтопен малцов агар се нанасят върху предметното стъкло, за да образуват тънък филм. Когато средата е твърда, тя се засява от млада култура (48 часа на малцов агар) с платинена тел, като прави надлъжна ивица и няколко много леки напречни линии. Стерилна вода се излива върху хартията, за да се поддържа висока степен на влажност вътре в плочата.