Кефирът подобрява синдрома на мастния черен дроб чрез инхибиране на липогенезния път при мишки

мастния

  • Субекти
  • Обобщение
  • Цел:
  • Резултати:
  • Завършеност:
  • Въведение
  • материали и методи
  • Приготвяне на кефир
  • Дизайн и проучване на животни.
  • Състав на тялото
  • Разхищение на енергия
  • Определяне на биохимични маркери.
  • Маслено червено петно ​​O
  • Оцветяване с хематоксилин и еозин
  • Имунохистохимично оцветяване
  • Обратна транскриптаза в реално време (RT) -PCR
  • Анализ на Western Blot
  • статистически анализ
  • Резултати
  • Ефект на кефира върху хранителния прием, телесното тегло, теглото на черния дроб, базалната скорост на метаболизма и енергийните разходи
  • Ефект на кефира върху състава на тялото
  • Ефект на кефира върху хепатомегалия и увреждане на черния дроб
  • Ефект на кефира върху TG и TC
  • Ефект на кефира върху серумните биохимични параметри, свързани с чернодробната функция
  • Ефекти от лечението с кефир върху експресията на гени, участващи в липидното окисление и липогенезата
  • Кефирът потиска липогенезата
  • Дискусия
  • Допълнителна информация
  • Файлове с изображения
  • Допълнителна фигура 1
  • Word документи
  • Допълнителна таблица 1
  • Допълнителна таблица 2
  • Допълнителна легенда за фигурата

Субекти

  • Метаболизъм
  • Безалкохолна мастна чернодробна болест
  • Затлъстяване

Обобщение

Цел:

Затлъстяването на черния дроб често се свързва със затлъстяване, инсулинова резистентност и диабет. Тежкият мастен черен дроб понякога се придружава от стеатохепатит и може да доведе до развитие на хепатоцелуларен карцином. Понастоящем няма ефективно лечение за неалкохолна мастна чернодробна болест (NAFLD); следователно последните изследвания се фокусират върху разработването на ефективни терапии за лечение на това състояние. Това проучване има за цел да оцени ефектите на кефира върху метаболизма на липидите в черния дроб при ob/ob мишки, които обикновено се използват за моделиране на чернодробни заболявания на черния дроб.

Резултати:

Кефирът, който произхожда от Кавказките планини, е слабо алкохолно, кисело ферментирало мляко. 5 Тази напитка традиционно се произвежда чрез инокулиране на млякото със зърно кефир. Кефирът се използва клинично за лечение на стомашно-чревни заболявания, хипертония, исхемична болест на сърцето и алергии. 5, 6 Няколко проучвания демонстрират множество биологични активности на кефира, включително антибактериални, противогъбични, антиоксидантни, антидиабетни, антитуморни и имуностимулиращи ефекти. Вуйчич и др. 7 показа, че консумацията на кефир намалява нивата на серумен холестерол при хората.

В това проучване изследвахме дали лечението с кефир подобрява симптомите на синдрома на мастния черен дроб при мишки с неактивни лептинови (ob/ob) гени. Експресията на няколко гена, които кодират протеини, участващи в пътя на липогенезата, включително стерол регулаторен елемент, свързващ протеин 1 (SREBP1), синтаза на мастни киселини (FAS) и ацетил-КоА карбоксилаза (ACC) и в липидния окислителен път, включително пероксизомен пролифератор-активиран рецептор α (PPARα) и чернодробен карнитин палмитоилтрансфераза-1α (CPT1α) са измерени след лечение с кефир. Целта на това проучване беше да се разбере ефикасността и механизма на ефектите на кефира върху синдрома на мастния черен дроб, за да се насърчи използването му при модулирането или лечението на NAFLD.

материали и методи

Приготвяне на кефир

Кефирните зърнени култури се инокулират (5%, w/v) и се размножават в стерилизирано мляко при 20 ° C в продължение на 20 h, за да се активират. Зърната се извличат през сито, възстановяват се (10%, тегло/обем) в стерилизирано прясно мляко и се инкубират при 20 ° С в продължение на 20 часа. 8 След филтриране на зърната, ферментиралите продукти се лиофилизират като кефирен прах с помощта на лиофилизатор (VirTis, Warminster, PA, USA).

Дизайн и проучване на животни.

Състав на тялото

Съставът на тялото на цялото животно беше оценен с помощта на анализатора на състава на цялото тяло на мишка minispec (LF50), базиран на TD-NMR (Bruker Optik, Ettlingen, Германия). Този метод осигурява точно измерване на мазнини, мазнини, свободна течност и вода в живи мишки.

Разхищение на енергия

Системата TSE LabMaster-3930 (Бад Хомбург, Германия), използвана за индиректна калориметрия, извършва количествени компютърни измервания на базалния метаболизъм и енергийните разходи. За да се изчисли консумацията на кислород (VO 2), производството на въглероден диоксид (VCO 2) и дихателният коефициент (съотношението на VCO 2 към VO 2), бяха наблюдавани концентрациите на газ на входа и изхода на затворените камери. Базалният (лек цикъл за гладуващи животни) и общите метаболитни скорости (48 непрекъснати часа за свободно хранени животни) са изчислени от консумацията на O2 и производството на CO 2. Епизодите на хранене се наблюдават с прецизни везни и непрекъснато се записват, за да се изчисли приема на храна.

Определяне на биохимични маркери.

Нивата на GOT, GPT, TC и TC в серума и черния дроб се измерват колориметрично с помощта на автоматизиран анализатор (анализатор Beckman-Coulter Synchron LX20; Beckman, Fullerton, CA, USA). 13

Маслено червено петно ​​O

Замразените чернодробни срезове (5–7 µm) се оцветяват с Oil Red O за 20–30 min, промиват се и се оцветяват с хематоксилин за 5 min, за да се определи чернодробното натрупване на липиди. Представителните фотомикрографии са заснети при увеличение 400 × с помощта на камера, монтирана на микроскоп.

Оцветяване с хематоксилин и еозин

Чернодробната тъкан се фиксира в 10% буфериран формалдехид и се изследва с оцветяване с хематоксилин и еозин, както е описано по-горе. 14, 15, 16

Имунохистохимично оцветяване

Фиксираните с формалдехид и вградени в парафин участъци се нарязват на дебелина 5 µm, разделят се и се хидратират през градиент от алкохоли във вода и след това се обработват с вряща вода в продължение на 15 минути. Секциите се инкубират в 3% водороден пероксид в продължение на 10 минути, за да се блокира ендогенната пероксидазна активност и след това се инкубират една нощ при 4 ° С с първични заешки моноклонални антитела срещу SREBP-1 и АСС. За извличане на антиген, срезовете бяха имунооцветени с помощта на VECTASTAIN ABC комплект (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, USA), следвайки спецификациите на производителя. Диаминобензидин се използва за развитие на оцветяване, а срезите са оцветени с хематоксилин. 17, 18 Отрицателната контрола се състои в заместване на нормалния серум с първично антитяло.