Естествени популации на клетки убийци и цитотоксична активност при свине, хранени с мляко

естествени

  • Субекти
  • Обобщение
  • Заден план:
  • Методи:
  • Резултати:
  • Завършеност:
  • Главен
  • Резултати
  • Размер на популацията на NK клетки
  • Експресия на интелектин-2 иРНК в NK клетки, изолирани от PBMC
  • NK цитотоксичност на клетките
  • Експресия на NK клетки, свързана с ген в NK клетки, изолирани от PBMC
  • Дискусия
  • Методи
  • Химически продукти
  • bLf
  • Диетично лечение и животински протокол
  • Вземане на проби
  • PBMC изолация
  • Пълна изолация на клетки на далак и MLN
  • Изолация на NK клетки и фенотипна идентификация за чистота
  • Анализ на цитотоксичността на NK клетки чрез поточна цитометрия
  • Фенотипна идентификация на кръвни мононуклеарни клетки и общо MLN клетки и далак
  • Експресия на NK клетъчен ген
  • Статистически анализ
  • Отчет за финансова подкрепа
  • Откровение
  • Допълнителна информация
  • Файлове на Powerpoint
  • Допълнителна фигура S1.

Субекти

  • NK клетки
  • Хранене
  • Педиатрия

Обобщение

Заден план:

Клетките с естествени убийци (NK) са компоненти на вродената имунна защитна система и техните нива се различават при кърмачета и кърмачета, хранени с адаптирано мляко (FF). Лактоферин (Lf) модулира цитотоксичността на NK клетките ex vivo. Ние предположихме, че диетата с говежди Lf (bLf) ще увеличи популациите на NK клетки и цитотоксичността.

Методи:

Прасенца се отглеждат със свине майки (SR), FF или 1 g/l, хранени с bLf (LF) в продължение на 21 дни. NK клетките (CD3 - CD4 - CD8 +) в кръвта (мононуклеарни клетки от периферна кръв (PBMC)), далака и мезентериалните лимфни възли (MLN) се определят чрез поточна цитометрия. PBMC NK клетките бяха тествани за цитотоксична активност срещу целеви K562 клетки ex vivo в присъствието на среда (не стимулирана), интерлевкин-2 или bLf. Експресията на NK клетъчна иРНК се определя чрез количествена PCR с обратна транскрипция.

Резултати:

Прасенцата SR и LF са имали повече NK клетки в MLN (P = 0,0097) и далак (P = 0,0980), отколкото прасенцата FF. В PBMC, прасенцата SR са имали повече NK клетки, отколкото прасенца FF (P = 0,0072); Прасенцата LF са междинни и не се различават от прасенца FF или SR. Експресията на NK клетъчен интелектин-2 иРНК е 2,5 пъти по-висока (P = 0,0095) при LF от прасенца SR или FF. NK клетките при прасенца SR проявяват по-висока цитотоксична активност (P

Изобилието на Intelectin-2 иРНК е по-високо в естествените клетки убийци от прасенца, хранени на 21-дневна bLf (LF, n = 3), отколкото при тези, отглеждани със свине майки (SR, n = 7) или хранени формули (FF, n = 6) животни. Нормализираните стойности за интелектин-2 бяха изчислени чрез разделяне на целевото средно количество на средното количество на референтния ген (пептидилпролил изомераза А). Разликата в гънките се изчислява за всяко измерване чрез разделяне на нормализираните целеви стойности на средната нормализирана целева стойност за FF прасета. Данните са изразени като средна стойност ± SD на разликата в гънките по отношение на FF животни. * P ≤ 0,05. bLf, говежди лактоферин.

Изображение в пълен размер

  • Изтеглете слайд PowerPoint

NK цитотоксичност на клетките

NK клетки, изолирани от PBMC от SR животни, нестимулирани или стимулирани с интерлевкин-2 (IL-2) или bLf, проявяват по-висока цитотоксична активност (P

Цитотоксичност на клетките с естествени убийци (NK), изолирани от свине майки, отгледани на 21 дни (SR; n = 11; черно), хранени с формула (FF; n = 14; бели) и хранени с bLf (LF; n = 11 сиви прасенца). NK клетките на периферна кръв (PBMC) бяха или нестимулирани (Unst), или стимулирани с интерлевкин-2 (IL-2) (20 ng/ml) или Lf (25 μg/ml) и инкубирани в продължение на 48 часа с DiOC 18 с етикет K562 целеви клетки с съотношение 10: 1 спрямо съотношението на целевите клетки.Пропидиев йодид (PI) се добавя в края на инкубацията, за да маркира мъртвите клетки. Цитотоксичността се отчита като унищожени целеви клетки (PI + DiOC 18 +) като процент от общите целеви клетки (DiOC 18 +). Данните са изразени като средна стойност ± SD. Пълен модел на обобщен линеен модел (GLM), P † показва значителни разлики между диетите. bLf, говежди лактоферин.

Изображение в пълен размер

  • Изтеглете слайд PowerPoint

Експресия на NK клетки, свързана с ген в NK клетки, изолирани от PBMC

В опит да се определят възможните молекулярни механизми, които биха могли да допринесат за намаляване на цитотоксичната активност на NK клетките на FF и LF животните, беше извършена количествена PCR с обратна транскрипция на РНК, извлечена от CD3 - CD4 - CD8 клетките. + NK от нестимулирана периферна кръв ( Фигура 3 ) Изобилието на перфорин мРНК, ефекторна молекула за NK клетки, е три и шест пъти по-ниско в NK клетки от FF и LF прасенца, съответно, отколкото при SR прасенца (P = 0.0038, Фигура 3а ). В допълнение, експресията на D рецептора на NK член на група 2 (NKG2D), активиращ рецептор, открит в NK клетките и известен като рецептор 1 на подсемейството К на лектиноподобния рецептор на клетки убийци, е 3, 5 пъти по-ниска в NK клетките на FF животни, отколкото в тези на SR животни, докато експресията на NKG2D рецепторния ген в NK клетките на LF животни е междинна и не се различава значително от никоя от групите ( Фигура 3б ).

Изпълнение ( да се ) и NK група 2 член D (NKG2D) рецептор ( б ) Изобилие от иРНК в естествени клетки убийци, изолирани от свине майки, отглеждани на 21 ден (SR, n = 7), хранени с формула (FF, n = 4-5) и прасенца, хранени с bLf (LF, n = 3). Нормализираните стойности за целевите гени бяха изчислени чрез разделяне на желаното средно количество на средното количество на референтния ген. Разликата в гънките се изчислява за всяко измерване чрез разделяне на нормализираните целеви стойности на средната нормализирана целева стойност за FF прасета. Данните са изразени като средна стойност ± SD. Различните индекси (*, †, ‡) показват значителни разлики при P ≤ 0,05. bLf, говежди лактоферин.