Експресия на pax8 в нормални и неопластични бъбречни тъкани имунохистохимично проучване -

нормални

  • Обобщение
  • Главен
  • материали и методи
  • Резултати
  • Израз на PAX8 при нормални възрастни бъбреци, уретери и пикочен мехур
  • Израз на PAX8 при тумори на бъбречен епител
  • Израз на PAX8 при уротелиален карцином на бъбречното легенче, уретерите и пикочния мехур
  • Израз на PAX8 в метастатичен RCC
  • Дискусия

Обобщение

Главен

Специфичните за клетъчната линия транскрипционни фактори наскоро се появиха като ценни диагностични маркери за човешки тумори. Тези протеини се експресират в ограничени видове ембрионални тъкани и са необходими за растежа и диференциацията на тези тъкани във високоспециализирани тъкани или органи. Тъй като някои протеини продължават да се експресират в диференцирани тъкани по време на възрастен живот или в неопластични тъкани от една и съща клетъчна линия, откриването на тези протеини може да покаже първичния сайт или диференциращата черта на тумора. Добре установените диагностични маркери в тази категория включват TTF-1, 1, 2 CDX2, 3 MITF, 4 и миогенин. 5, 6

Бъбречно-клетъчният карцином (RCC) е известен със своята склонност към съдова инвазия и отдалечени метастази. Значителен брой случаи са с екстраренален растеж или метастази по време на диагнозата или след операция. 7 Поради разнообразните си хистологични характеристики, метастатичният RCC може да бъде диагностично предизвикателство и често изисква допълнителни тестове, като имунохистохимия, за потвърждение. 8 Много производители, включително цитокератини (CK), CK7, CK20, EMA, виментин, 9 c-kit, 10 P504S, 11 RCC маркер, 12, 13 аквапорин-1, 14 CD10, 15 и карбоанхидраза 9 (CAIX) 16, 17 са използвани в различни панели с променлива чувствителност и специфичност.

материали и методи

В това проучване са използвани сто четиридесет и три първични и 39 метастатични бъбречни епителни тумори. Пробите от първичен бъбречен епителен тумор идват от проби с радикална нефректомия и са конструирани в микрочипове от пет тъкани с три представителни ядра от 1 mm от всеки отделен случай. Използвани са конвенционални тъканни участъци от метастатични тумори. Четиридесет уротелиални карциноми на пикочния мехур също бяха включени в един единствен тъканен микрочип, който беше създаден по същия начин, както при първичните бъбречни епителни тумори. Нормалните контроли на тъканите включват 40 незасегнати ядра на бъбречния паренхим, съдържащи се в тъканните микрочипове, както и тъканни участъци от невключените бъбречни тазови зони (N = 5), уретери (N = 5) и пикочен мехур (N = 10).

Имунохистохимичното оцветяване с PAX8 се извършва върху самооцветяване на Dako със заешко анти-PAX8 поликлонално антитяло (1: 100) (Poteintech, Inc., Чикаго, IL, САЩ). В обобщение, вградените в парафин тъканни секции (с дебелина 5 μm) са получени от ТМА или тъканни блокове и са изпечени през нощта във фурната при 60 ° С. Секциите са последователно обезпаразитени и дехидратирани с PRO-почистващ препарат. PAR (Anatech, Battle Creek, MI, САЩ) В поредица от низходящи концентрации на алкохол и вода. Възстановяването на антигена се извършва чрез обработка на парата в продължение на 40 минути и охлаждане в продължение на 20 минути в клетъчна етикетна трилогия с разтвор на етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA). След възстановяване на антигена срезовете бяха инкубирани с буфериран с Tris разтвор с Tween-20 в продължение на 5 минути и след това заредени в автоматичната система за оцветяване Dako. Системата EnVision (Dako) се използва за визуализиране на първичното антитяло с хематоксилинов контраст.

Чувствителността и специфичността на PAX8 антитялото са валидирани с различни нормални тъкани и само ясно ядрено оцветяване се счита за положително за PAX8. 29 Дифузно положително оцветяване се нарича> 50% от туморните клетки, оцветяващи положително за PAX8; в противен случай оцветяването се счита за фокално положително. За метастатични CRCs, случаите с> 5% оцветяване на туморни клетки за PAX8 се считат за положителни. Интензивността на PAX8 оцветяването в туморите е оценена като слаба (1+), умерена (2+) и силна (3+).

Резултати

Експресия на PAX8 в нормален възрастен бъбрек, уретери и пикочен мехур

PAX8 оцветяване беше открито в епителните клетки на проксималните и дисталните бъбречни тубули, бримките на Henle, събирателните канали и теменните епителни клетки на капсулата на Bowman (Фигура 1а и b). Оцветяването винаги е било по-силно в дисталните тубули, париеталните клетки на капсулата на Боуман и събирателните канали (3+), отколкото в проксималните тубули (1+), при които също се наблюдава неспецифично цитоплазматично оцветяване. Силно PAX8 (3+) оцветяване беше открито във всички слоеве на лигавичните уротелиални клетки в бъбречната папила и в началната част на бъбречното легенче. В дисталните бъбречни легенчета и уретерите PAX8-положителните клетки постепенно се ограничават до междинните или базалните слоеве на уротелия с намалена интензивност на оцветяване (2+) (Фигура 1в-д). Няма оцветяване с PAX8 в уротелиума на пикочния мехур (Фигура 1е). PAX8 оцветяване не е открито в подоцити, мезангиални клетки, ендотелни клетки или в интерстициум или лимфни съдови структури на бъбреците.