Ehrlichia canis при привидно здрави домицилирани кучета и при кърлежи от четири общини на

UNIVERSIDAD AGRARIA DE LA HABANA Факултет по ветеринарна медицина Fructuoso Rodríguez Pérez Ehrlichia canis при привидно здрави домицирани кучета и при кърлежи от четири общини в Западна Куба Теза като опция за научна степен на доктор на ветеринарните науки Автор: DMV Maylín González Navarrete, M. Sc Mayabeque, 2018

домицилирани

UNIVERSIDAD AGRARIA DE LA HABANA Факултет по ветеринарна медицина Fructuoso Rodríguez Pérez Ehrlichia canis при привидно здрави кучета и кърлежи от четири общини в Западна Куба Теза като опция за научна степен на доктор на ветеринарните науки Автор: DMV Maylín González Navarrete, M. Sc Tutors: DMV Adivaldo Henrique Da Fonseca, д-р C. DMV Eugenio Roque López, д-р C. Съветници: DMV María Antonia Abeledo García, д-р C. Lic. Belkis Corona González, д-р C. Mayabeque, 2018

Посвещение На всички нас, които имаме мечтата да запазим да запазим, за да поддържаме целостта на природата и животните като част от нея. На всички нас, които не спираме да мечтаем, да се борим, да разследваме и винаги да търсим най-добрия начин да се запазим. На новите поколения, които сме длъжни да почитаме с работата и напътствията си, като се подготвяме всеки ден по-добре, така че нашият пример да е най-добрият начин за преподаване.

Табличен индекс Таблица 1. Разширение на повърхността, гъстота на населението и плътност на кучетата в извадковите общини. 38 Таблица 2. Количество смеси от кърлежи според етапа от всяка община. 41 Таблица 3. Праймери, използвани за откриване на E. canis чрез вложен PCR. 42 Таблица 4. Графици за амплификация за всеки вложен PCR анализ (Murphy et al., 1998). 43 Таблица 5. Процент кучета с IgG антитела срещу Е. canis според възрастта, породата и пола. 56 Таблица 6. Брой кучета и къщи, взети на проби по общини. Разпределение на включените в извадката къщи според броя на кучетата на къща. 60 Таблица 7. Брой събрани кърлежи и заразени кучета по общини. 65 Таблица 8. Класификация на интензивността на заразяване от R. sanguineus s.l. при кучета с проби. 70 Таблица 9. Степен на заразяване от R. sanguineus s.l. в изследваните общини. 70 Таблица 10. Връзка на променливите и позитивността към E. canis чрез вложен PCR в четири общини от западния регион на Куба (едномерна логистична регресия). 86 Таблица 11. Рискови фактори, свързани с позитивността към E. canis чрез вложен PCR в четири общини в западния регион на Куба. (Многовариантна логистична регресия). 87

100 bp (Promega, Madison, САЩ); Ред 2 и 3: отрицателен контрол; Редове 4-15: ДНК смеси от кърлежи, Линия 16: положителен контрол. 77 Фигура 15. Процент кучета, взети на проби по възрастова категория. 84

Списък на съкращенията, съкращенията и символите ДНК: дезоксирибонуклеинова киселина Ca Cl2: калциев хлорид dntps: дезоксирибонуклеотид трифосфати EDTA: етилендиаминтетраоцетна киселина ELISAi: непряк ензимен имуносорбентен анализ Mg хлорид ml: милилитър mm: милимоларен OR: съотношение на шансовете pb: базови двойки PBST: фосфатно буфериран физиологичен разтвор рН 7,2-7,4 с 5% Tween 20 PBS: фосфатно буфериран физиологичен разтвор PCR: полимеразна верижна реакция ph: Хидрогениален потенциал pmol: пикомол рРНК: рибозомна обороти в минута на рибонуклеинова киселина: обороти в минута TAE: Трис-ацетат-EDTA буфер Taq: ДНК полимеразен ензим, изолиран от бактерията Thermus aquaticus U: единица V: волта µg: микрограм μl: микролитър µm: микромоларна 16S rrna: 16S част от рибозомната РНК: Търговска марка C: Целзий

ОБЩ ИНДЕКС ВЪВЕДЕНИЕ. 2 Хипотеза. 5 Обща цел. 5 Специфични цели. 5 НАУЧНА НОВОСТ И ПРИНОС. 7 ГЛАВА I. БИБЛИОГРАФСКИ ПРЕГЛЕД. 8 1.1. Понятие и история на кучешката моноцитна ерлихиоза. 8 1.2. Етиологичен агент. 9 1.2.1. Таксономия на E. canis. 10 1.2.2. Морфология. 10 1.3. Епидемиология на кучешката ерлихиоза. 11 1.3.1. Географско разпространение на E. canis. 11 1.3.2. Вектори. 12 1.3.3. Домакини. 19 1.3.4. Предаване на E. canis. 1.3.5. Рискови фактори, свързани с инфекция с E. canis. 21 1.4. Патогенеза на кучешката ерлихиоза. 23 1.4.1. Клинична картина. 25 1.5. Диагностика на Е. canis. 27 1.5.1. Диагностика чрез кръвна мазка. 28 1.5.2. Клетъчна култура. 29 1.5.3. Серологична диагноза. 30 1.5.4. Молекулярна диагноза чрез полимеразна верижна реакция в гостоприемника. 31 1.5.5. Молекулярно откриване във вектора. 32 1.5.6. Диференциална диагноза. 33 1.5.7. Множество инфекции или коинфекции. 33 1.6. Профилактика и контрол на кучешката ерлихиоза. 34 1.6.1. Предотвратяване. 34 1.6.2. Контрол на кърлеж R. sanguineus. 35 ГЛАВА II. МАТЕРИАЛИ И ОБЩИ МЕТОДИ. 38

4.3.5. Идентификация на къщите с кучета, заразени от R. sanguineus s.l. 71 4.2.4. Частични заключения. 73 ГЛАВА V. Ehrlichia canis при кърлежи, събрани от кучета, взети в пробите в изследваните общини. 75 5.1. Въведение. 75 5.2. Материали и методи. 76 5.2.1. Събиране и опазване на кърлежи. 76 5.2.2. Вложен PCR анализ. 76 5.2.3. Последователност и анализ на амплифицираните фрагменти. 76 5.3. Резултати и дискусия. 76 5.4. Частично заключение. ГЛАВА VI. Рискови фактори, свързани с Ehrlichia canis при привидно здрави кучета с местожителство в общините Habana del Este, Boyeros, Cotorro и San José de las Lajas. 81 6.1. Въведение. 81 6.2. Материали и методи. 82 6.2.1. Характеристика на извадковата популация. 82 6.2.2. Епидемиологичен въпросник. 82 6.2.3. Статистически анализ. 83 6.3. Резултати и дискусия. 83 6.3.1. Характеристика на извадковата популация кучета. 83 6.3.2. Анализ на рисковите фактори. 6.4. Частично заключение. 91 ГЛАВА VII. Генерална дискусия. 92 VIII. ОБЩИ ЗАКЛЮЧЕНИЯ. 98 IX. ПРЕПОРЪКИ. 100 X. БИБЛИОГРАФСКА ЛИТЕРАТУРА. 1 IX. ПРИЛОЖЕНИЯ. 1

Въведение 4. Идентифицирайте рисковите фактори, свързани с инфекция с E. canis при привидно здрави домашни кучета в разследваните общини. 6