Блокирането на активността на tlr2 намалява и стабилизира напредналите атеросклеротични лезии в

активността

  • Обобщение
  • Цел:
  • Методи:
  • Резултати:
  • Завършеност:
  • Въведение
  • материали и методи
  • Животни и експериментален дизайн.
  • Събиране и обработка на тъкани.
  • Биохимичен анализ
  • Хистологично и имунохистохимично оцветяване.
  • TdT-медиирани никелови dUTP тестове за етикетиране на място
  • Уестърн петна
  • статистически анализ
  • Резултати
  • Блокирането на активността на TLR2 намалява и стабилизира атеросклеротичните лезии в брахиоцефалната артерия
  • TLR2 блокадата отслабва възпалението в атеросклеротичните артерии
  • TLR2 блокадата намалява апоптозата на макрофагите и експресията на CHOP при напреднали атеросклеротични лезии
  • TLR2 медиира ускорено атеросклеротично образуване и регулира експресията на CHOP и апоптозата при ApoE-дефицитни мишки, хранени с HC диети
  • Дискусия
  • Принос на автора

Обобщение

Цел:

Сигнализирането за подобен на рецептор 2 (TLR2) играе критична роля в инициирането на атеросклероза. Целта на това проучване е да се изследва дали блокирането на активността на TLR2 може да доведе до терапевтични ефекти върху напреднала атеросклероза.

Методи:

На възраст от четиридесет седмици мишки с дефицит на аполипопротеин Е (ApoE -/-), хранени с нормална диета, се инжектират интравенозно с TLR2 неутрализиращо антитяло или изотип, съвместим IgG в продължение на 18 седмици. ApoE -/- Tlr2 -/- двойно ударени мишки бяха взети като положителна контрола. В края на леченията се измерват плазмените нива на липидите и се анализират морфологията на плаката, експресията на провъзпалителния цитокин и апоптозата в артериите. Във втората част на това проучване 6-седмични мишки ApoE -/- и ApoE -/- Tlr2 -/- хранеха диета с висок холестерол в продължение на 12 до 24 седмици, нивата на експресия на TLR2 и апоптотични маркери в артериите бяха разгледани.

Резултати:

Блокирането на активността на TLR2 с TLR2 неутрализиращо антитяло или инактивирането на гена Tlr2 не променя нивата на плазмените липиди при ApoE -/- мишки. Фармакологичните и генетични манипулации обаче значително намаляват размера на плаката и стенозата на съдовете и увеличават стабилността на плаката в брахицефалните артерии. Защитните ефекти на антагонизма на TLR2 са свързани с потисната експресия на провъзпалителните цитокини IL-6 и TNF-α и инактивирането на транскрипционните фактори NF-kB и Stat3. В допълнение, блокирането на TLR2 активността отслабва ER-индуцираната от стреса апоптоза на макрофагите в брахиоцефалните артерии, което може да допринесе за разрешаването на некротичните ядра при напреднала атеросклероза. Освен това диетата с висок холестерол ускорява атеросклеротичното образуване и увеличава проапоптотичната експресия на CHOP протеин и апоптозата при мишки ApoE -/-, отколкото при мишки ApoE -/- Tlr2 -/- .

Завършеност:

Фармакологичното или генетичното блокиране на активността на TLR2 намалява и стабилизира напреднали атеросклеротични лезии при ApoE -/- мишки. Следователно насочването на сигнали за TLR2 може да бъде обещаваща терапевтична стратегия срещу напреднала атеросклероза.

Въведение

Атеросклерозата е често срещана причина за сърдечно-съдови заболявания. Сърдечно-съдовите заболявания са водещата причина за смърт и представляват нарастваща заплаха за човешкото здраве в целия свят 1. Епидемиологичните и експериментални проучвания установяват преобладаваща роля за възпалението във всички стадии на атеросклероза, от образуването на ранни стабилни атеросклеротични плаки до напреднали плаки, които са склонни да се разкъсат 2, 3, 4, 5. Наскоро няколко проучвания са фокусирани върху ефектите на фармакологичните интервенции върху стабилността на напреднали плаки, тъй като разкъсването на нестабилни лезии допринася за остър коронарен синдром 4, 6, 7. Нестабилните плаки се характеризират с големи пълни с липиди некротични ядра, капсулирани от тънък влакнест слой, високи нива на противовъзпалителни медиатори и матрични протеази и апоптоза. Развитието на нестабилни плаки е свързано с участието на вродената и адаптивна имунна система.

Toll-подобни рецептори (TLR) са семейство рецептори за разпознаване на модели, които играят ключова роля за вродения имунитет и инициират възпалителни реакции. Лигирането на тези рецептори инициира активирането на ядрен фактор кВ (NF-кВ), което води до експресията на широк спектър от възпалителни гени 8, 9. Сред характеризираните TLRs, TLR2 е уникален поради способността си да хетеродимеризира с TLR1 или TLR6, което води до относително широка лигандна специфичност, която включва както ендогенни, така и екзогенни лиганди. По-специално, всички потенциални ендогенни агонисти на TLR2, включително бигликан, хромозомна кутия протеин 1 с висока подвижност (HMGB1) и окислени липопротеинови компоненти, се намират в атеросклеротични лезии 12, 13, 14. Освен това, сигналният път на TLR2 е свързан със стресовата реакция на ендоплазмения ретикулум (ER). ER стресът може да увеличи експресията на TLR2 in vitro и in vivo, а TLR2 допринася за апоптозата в макрофагите, които са подложени на липидно предизвикан ER стрес. Следователно, TLR2 може да бъде потенциална цел за терапевтични интервенции при лечението на атеросклероза.

материали и методи

Животни и експериментален дизайн.

ApoE -/- Tlr2 -/- мишки са генерирани от хетерозиготни кросоувъри на ApoE -/- мишки (фон C57BL/6, лаборатория Jackson) и мишки Tlr2 -/- (фон C57BL/6, лаборатория Jackson). Генотиповете на хомозиготни двойни нокаутиращи или ApoE единични нокаутни мишки бяха потвърдени чрез PCR, както е описано по-рано 18. Всички животни бяха настанени в стандартни условия на влажност, стайна температура и цикли на тъмна светлина, с достъп до вода и храна по желание. Проучванията са проведени в съответствие с принципите, очертани от Институционалния комитет по етика на грижите и лечението на животните в биомедицинските изследвания (Пекин, Китай).

Събиране и обработка на тъкани.

След като мишките гладуват в продължение на 4 часа, кръвта се получава през ретроорбиталния венозен плексус за измерване на липидите. След това мишките се анестезират, използвайки 50 mg/kg ip пентобарбитал и се перфузират през лявата сърдечна камера с леден студен фосфатен буфериран физиологичен разтвор под физиологично налягане. Аортите бяха бързо изрязани, щракащо замразени от аортната дъга до бифуркацията на илиата и държани при -80 ° С преди анализ на протеина. Цялата брахиоцефална артерия на всяко животно беше фиксирана в 4% параформалдехид в продължение на 24 часа при 4 ° C, вградена в парафин и разделена серийно (с дебелина 5 μm).