SINDY NATHALY NICOLA BENAVIDES - PDF Безплатно изтегляне
ТИПИФИКАЦИЯ НА ВИРУСА НА ЧОВЕШКИ ПАПИЛОМА HPV И НЕЙНИТЕ ВРЪЗКИ С ХАРАКТЕРИСТИКИ НА НАСЕЛЕНИЕТО И ТРАВМИ ПРИ РАК НА МАТКАТА ВРАТА ПРИ ЖЕНИТЕ ОТ ОБЩИНАТА ПАСТО СИНДИ НАТАЛИ НИКОЛА БАНОВА ДЕНСАВИНДАНСКИ ДЕНСАВАРСКИ ДЕНСАВЕР
ТИПИФИКАЦИЯ НА ВИРУСА НА ЧОВЕШКИ ПАПИЛОМА HPV И НЕЙНИТЕ ВРЪЗКИ С ХАРАКТЕРИСТИКИ НА НАСЕЛЕНИЕТО И ТРАВМИ ПРИ РАК НА МАТКАТА ВРАТА НА ЖЕНИТЕ ОТ ОБЩИНА ПАСТО СИНДИ НАТАЛИ НИКОЛА БЕНВАЙДЪР ГЛАВА БЕНВАЙДЪР ГЛАВА БЕНВАДРИ ГЕНЕРА БЕНВАЙДЪР ВЪЗДЕЙСТВИЕ ЗА ГЛАВЕН ВИДЕН В ГЕНЕРА БИНВЕР В ГЕНЕРА БИВЕН ВИДЕЙ Магистър Науки Микробиология УНИВЕРСИТЕТ НА НАРИНО ФАКУЛТЕТ ПО ТОЧНИ И ПРИРОДНИ НАУКИ КАФЕДРА ПО БИОЛОГИЯ САН ДЖУАН ДЕ ПАСТО 2014 2
Идеите и заключенията, предоставени в дипломната работа, са изключителната отговорност на автора. Член 1 № 324 от 11 октомври 1966 г., издаден от Почетния висш директивен съвет на Университета в Нариньо. 3
Бележка за приемане Милена Гереро Флорес Директор Доли Марго Ревело Ромо Хурадо Едит Мариела Бурбано Росеро Хурадо Сан Хуан де Пасто, май 2014 г. 4
На моите колеги Хуан Пабло, Ванеса, Даяна, Никсън, Карлос, Каролина, Марио, Хуан Густаво, Марсела, Кристиан за тяхната компания. Благодаря много на всички тях. 6
ПОСВЕТЕНИЕ На теб, Боже, че ми даде сили, енергия и любов да завърша това разследване. На моите родители Хосе Никола и Сесилия Бенавидес, на моите братя Рикардо, Даяна, Давид и Маурисио, които винаги ме подкрепяха и вярваха, давайки ми своята любов и разбиране. На моите колеги за цялата им помощ, думи за подкрепа, съвет и добра енергия. 7
СЪДЪРЖАНИЕ ВЪВЕДЕНИЕ. 23 1. ЦЕЛИ. 26 1.1 ОБЩА ЦЕЛ. 26 1.2 СПЕЦИФИЧНИ ЦЕЛИ. 26 2. СЪСТОЯНИЕ НА ИЗКУСТВОТО. 27 2.1 ЧОВЕШКИ ВИРУС НА ПАПИЛОМА - HPV. 27 2.1.1 Видове и класификация на HPV. 27 2.1.2 Геном и структура на HPV. 29 2.1.3 Описание на регионите на генома на HPV. 30 2.1.4 Област на късен израз L1 и L2. 31 2.1.5 Варианти на човешкия папиломен вирус. 32 2.2 HPV и рак на маточната шийка. 33 2.3 Естествена история на CCU. 36 2.4 Откриване и молекулярно типизиране на HPV. 38 2.5 Рискови фактори в CCU. 41 2.5.1 Брой сексуални партньори. 41 2.5.2 Възраст на започване на полов акт. 2.5.3 Употреба на орални контрацептиви. 42 2.5.4 Инфекция с други организми. 42 2.5.5 Пушене. 43 8
2.5.6 Брой бременности. 43 2.5 7 Конвенционална цитология. 44 3. МЕТОДОЛОГИЯ. 46 3.1 Описание на изследваната популация. 46 3.1.1 Етични съображения. 47 3.1.2 Критерии за включване. 47 3.1.3 Критерии за изключване. 47 3.1.4 Популационни променливи, разгледани в проучването. 47 3.1.5 Размер на пробата. 47 3.2 Регистрация на информация, включване на проби, транспорт и консервация. 47 3.2.1 Регистър на информацията за населението. 47 3.2.2 Еднофамилен анализ. 48 3.2.3 Включване на проби. 48 3.3 Обработка на проби за молекулярно типизиране на HPV. 48 3.4 Качествен анализ на проби чрез β-глобинова PCR. 49 Подготовка на проби за качествен анализ. 49 3.4.1 Оценка на качеството на пробата чрез PCR/HHB амплификация. 49 3.4.2 Проверка на PCR/HHB продукти чрез електрофореза в агарозен гел. 51 3.4.3 Интерпретация на резултатите от PCR/HHB. 51 3.5 Откриване и молекулярно типизиране на HPV. 51 3.5.1 Въвеждане на текст с обратна линия. 52 3.5.2 PCR-L1 GP5 +/GP6 + и ДНК секвениране. 56 9
4.3.1 Характеристики на популацията при жени с цитология (-), ASCUS и HPV инфекция. 87 4.3.1.1 Социодемографски характеристики и HPV инфекция. 87 4.3.1.1.1 Възраст и HPV инфекция. 88 4.3.1.1.2 Брой сексуални партньори и HPV инфекция. 89 4.3.1.2 Гинеко-акушерски характеристики и HPV инфекция. 91 4.3.1.2.1 Метод на планиране и HPV инфекция. 4.3.1.2.2 Други организми и HPV инфекция. 93 4.3.1.3 Реактивни клетъчни промени, свързани с възпаление и HPV инфекция. 93 4.3.2 Анализ на жени с LIEBG, LIEAG, CCU лезии и HPV инфекция. 94 4.3.2.1 Възраст на жените с LIEBG, LIEAG и CCU и HPV инфекция. 94 4.3.2.2 LIEBG, LIEAG, CCU лезии и HPV инфекция. 96 4.3.2.3 LIEBG, LIEAG, CCU лезии и типове HPV. 100 ЗАКЛЮЧЕНИЯ. 102 ПРЕПОРЪКИ. 104 БИБЛИОГРАФИЯ. 105 ПРИЛОЖЕНИЯ. 127 11
Таблица 23. Честота на HPV инфекция според възрастта на жените с LIEBG, LIEAG и CCU. 95 Таблица 24. Честота на HPV инфекция при жени с LIEBG, LIEAG и CCU. 97 Таблица 25. Честота на HPV типове, открити при жени с LIEBG, LIEAG и CCU. 100 13
СПИСЪК НА ФИГУРИТЕ Фигура 1. Филогенетично дърво на LCR HPV 16 последователности. 28 Фигура 2. Геном на човешкия папиломен вирус. 29 Фигура 3. Естествена история на цервикалната онкогенеза на HPV. 36 Фигура 4. Хистологично развитие на рак на маточната шийка. 38 Фигура 5. Плоскоклетъчна атипия (ASC-US). 45 Фигура 6. Карта на община Пасто, където се намират местата за включване на пробите. 46 Фигура 7. Звънене на PCO3 и PCO4 праймери в човешкия β-глобинов ген, позиция 13 nta при 123 ntg. 50 Фигура 8. Представяне на мястото на звънене на праймери GP5 + и GP6 + в генома на HPV 18, позиция 6 600 nta при 6 744 ntg. 52 Фигура 9. Амплификация на гена β-глобин в проби за измиване на маточната шийка. 73 Фигура 10. Амплификация на β-глобиновия ген в биопсични проби. 74 Фигура 11. Анализ за оптимизация на Mg ++. 77 Фигура 12. Амплификация на гена HPV L1. 77 Фигура 13. Подравняване на последователността, идентифицирана в проба UDN 217 от Blastn и MegaBlast от NCBI. 80 14
СПИСЪК НА ПРИЛОЖЕНИЯТА Приложение А. Формуляр за информирано съгласие. 127 Приложение Б. Формат на клиничната история за профилактика на рака. 132 Приложение В. Формат на резултатите от цитологията. 133 Приложение D. Тест за оптимизация на Mg ++ за PCR/L1 GP5 +/GP6 +. 133 Приложение Д. Отрицателни резултати от петна с обратна линия. 135 Приложение Е. Подравняване на последователностите на проби за четкане на маточната шийка и биопсия. 136 15
prb: Ретинобластомен протеин RCS: от съкращението на английски [Системата за бързо улавяне] mRNA: Messenger Ribonucleic Acid RLB: от съкращението на английски [Reverse Line Blot] HSV: Herpes Simplex Virus HSV-2: Herpes Simplex Virus Type 2 HIV: Вирус на човешка имунна недостатъчност HPV: Вирус на човешки папилома HPV-RA: Вирус на човешки папилома с висок риск HPV-BR: Вирус на човешки папилома с нисък риск 17
CIN II: Счита се за високостепенна сквамозна интраепителна лезия. Ограничен до базалните две трети от цервикалния епител. CIN III: При този вид нараняване, което също се счита за високостепенно, дисплазията е тежка и обхваща повече от две трети от цервикалния епител. В някои случаи, включително цялата дебелина на цервикалната лигавица. PCR-L1: Полимеразна верижна реакция, която позволява амплифицирането на фрагмент от приблизително 150 bp от гена HPV L1, използвайки праймерите GP5 +/GP6 +. ПРЕДВАРИТЕЛНОСТ: Това е броят на случаите на заболяване или събитие в популация и към даден момент. REVERSE LINE BLOT: Това е анализ, основан на обратна хибридизация, който позволява идентифицирането на 37 HPV генотипа, използвайки система за миниблотер и хибридизационна мембрана, след усилване на пробите чрез GP5 +/GP6 + PCR. HPV-RA: Човешки папиломен вирус с висок онкогенен риск, свързан с развитието на инвазивни аногенитални карциноми. BR-HPV: Човешки папиломен вирус с нисък онкогенен риск, свързан с доброкачествени лезии-брадавици и кондиломи. двайсет