Определяне на пола, използвайки техниката на полимеразна верижна реакция при камили

В
В

Персонализирани услуги

Списание

SciELO Analytics
Google Scholar H5M5 ()

Член

Испански (pdf)
Статия в XML
Препратки към статии
Как да цитирам тази статия
SciELO Analytics
Автоматичен превод
Изпратете статия по имейл

Индикатори

Цитирано от SciELO

Свързани връзки

Подобно в SciELO

Дял

Вестник за ветеринарни изследвания на Перу

версия В отпечатана ISSN 1609-9117

Rev. investiga. ветеринар. Перу v.23В n.3В ЛимаВ АвгустВ 2012

Използване на полимеразна верижна реакция за полов контакт с южноамерикански камили

Ваня Черна гора В. 1, Ленин Матурано Х. 1,2,3, Джейн С. Уилър 2, РаГел Росадио А. 1,2

Целта на това проучване е да се разработи PCR техника за определяне на пола на южноамериканските камили (CSA), като се използват последователности на цинков пръстен протеин (ZF) от проби от кръв и фекалии, както и клетки от ембриони от алпака. Използвани са общо 28 проби от кръв от алпака, лама и викуана, 20 фекални проби от викуа и гуанако и 22 ембриони от алпака, събрани между 72 и 96 часа следкопула. Пробите от фекалии и ембриони са запазени съответно в 96% и 70% етанол. ДНК беше извлечена от кръв и изпражнения с помощта на търговски комплекти. Използвани са три метода (кипене, протеиназа К и фенол-хлороформ) за извличане на ДНК от ембриони на алпака. Бяха разработени две PCR техники за анализ на ДНК: мултиплекс (за ДНК на фекални и кръвни проби) и хеминиран PCR (за ДНК на ембрионални клетки). Мултиплексната PCR точно определя пола в 100% от ДНК пробите, извлечени от кръв, в 87,5% от пробите, извлечени от пресни изпражнения и в 50% от 4-годишните фекални проби. Хеминираната PCR обаче не може да бъде оптимизирана.

Ключови думи: ДНК, PCR, секс, южноамерикански камили

ВЪВЕДЕНИЕ

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

Получаване на ДНК проби

ДНК екстракция от кръв

ДНК екстракция от изпражнения

ДНК екстракция от ембриони

Количествено определяне на ДНК

Концентрацията и степента на чистота на ДНК, извлечена от всички проби, бяха определени чрез спектрофотометрия при 260 nm и 280 nm. Качеството на ДНК се проверява чрез електрофореза върху агарозен гел.

Процесът на оптимизация в кръвната ДНК се състои в амплифициране на сегменти с различни размери на силно консервирания ZF ген при бозайници, като се използват три праймера (Aasen и Medrano, 1990). Протоколите използваха праймерите ZFX2 и ZFX4 за усилване на сегмент от 250 базови двойки (bp), присъстващ на двата полови хромозоми (ZFX и ZFY), и трети обратен ZFY2, използван заедно с праймера ZFX2 за усилване на сегмент от 130 bp, присъстващ само върху Y хромозомата (ZFY) (Черна гора и др., 2007).

Разделителна способност на разширени фрагменти

Продуктите от всяка PCR се анализират на 2% агарозен гел в 0,5X TBE буферен разтвор (Tris, борна киселина, EDTA), в хоризонтална камера за електрофореза заедно с маркер за молекулно тегло, за да се определи размерът. Приблизително на амплифицираните фрагменти . Продуктите за PCR бяха оцветени с етидиев бромид, визуализирани на трансилуминатор и заснети с камера Polaroid (DS 34).