Обезогенният фенотип на потомството на майки, хранени с диета с високо съдържание на

фенотип

  • Субекти
  • Обобщение
  • Заден план:
  • Цел:
  • Методи:
  • Резултати:
  • Завършеност:
  • Въведение
  • материали и методи
  • Животни и диети
  • Орален толеранс към глюкоза, наддаване на тегло и тест за прием на храна
  • Колекция от тъкани
  • Експресия на хипоталамусен ген
  • Анализ на концентрацията на фолиева киселина
  • Глобален анализ на метилирането на ДНК на хипоталамуса
  • Статистически анализ
  • Резултати
  • Прием на храна, наддаване на тегло и реакция на глюкоза
  • Експресия на хипоталамусен ген
  • Състояние на фолиевата киселина
  • Глобален статус на метилиране
  • Дискусия

Субекти

  • Генната експресия
  • Хипоталамус
  • Хранителни добавки
  • Затлъстяване

Обобщение

Заден план:

Високо поливитаминните диети (10 пъти AIN-93G, HV), хранени по време на бременност с плъхове Wistar, увеличават характеристиките на метаболитния синдром при потомството, когато се отбият от препоръчаната витаминна диета (RV).

Цел:

За да се определи дали ефектите от гестационните HV диети върху обезогенните фенотипове при потомството възникват в резултат на променен хипоталамусен контрол върху поведението на хранене и дали повишеният им прием на храна може да бъде предотвратен чрез хранене с HV или високо съдържание на фолиева киселина (10 пъти фолат, HFol) диети

Методи:

Мъжки потомци на майки, хранени с HV диета по време на бременност, отбити от диети с RV, HV или HFol, са сравнени с тези, родени на язовири с RV и отбити от RV диета в продължение на 29 седмици. Приемът на храна за 72 часа и телесното тегло се измерват съответно на всеки две седмици и седмично. Отговорът на глюкозата към натоварване с глюкоза е измерен на 18 седмици след отбиването. Хипоталамусна генна експресия на свързани с храната невропептиди, включително невропептид Y, про-опиомеланокортин (POMC), инсулинов рецептор, лептинов рецептор, мозъчен невротрофичен фактор (BDNF), допаминови рецептори (DopaR1/2/5) и серотонин (SeroR1A/2A/2C), както и глобалното метилиране на ДНК и концентрациите на фолат в мозъка и плазмата са измерени на 29 седмици след отбиването.

Резултати:

Диетата на кученца HV или HFol повишава концентрациите на фолат в мозъка и плазмата и предотвратява увеличения прием на храна (5%, P = 0,03), телесното тегло (8%, P = 0,0006) и отговора на глюкозата към натоварване с глюкоза (36%, P = 0,02 ), открити при тези, хранени с диета с RV. Експресията на аноректичен POMC (P = 0,004) и BDNF (P = 0,02) е по-висока и DopaR1 е по-ниска (P = 0,06) при кученца, хранени с HV диета. Диетата за кученца HFol доведе BDNF частично до контролното ниво (P = 0,02) и намали SeroR2A (P = 0,008). Експресията на други гени не е засегната. Цялостното метилиране на ДНК е сходно между диетичните групи.

Завършеност:

Обезогенният фенотип в потомството на HV-хранена плячка се предотвратява чрез хранене на диети за кученца HV или HFol, вероятно поради модулация на регулаторните механизми на приема на храна след отбиването.

Въведение

материали и методи

Животни и диети

Схематична диаграма на изследването ( да се ) дизайн и ( б ) протокол за мъжко потомство от 0 до 29 седмици след отбиването. Съкращения на диетите: RV, диетата AIN-93G с препоръчани витамини; HV, 10 пъти препоръчаната мултивитаминна смес; HFol, RV + 10 пъти съдържанието на фолиева киселина. Диетите, консумирани по време на бременност, са посочени преди таблото. Диетите, консумирани от потомството, обозначени след тирето.

Изображение в пълен размер

Орален толеранс към глюкоза, наддаване на тегло и тест за прием на храна

Фигура 1b описва протокола за изследване. Приемът на храна за 72 часа се измерва на всеки 2 седмици от 0 до 29 седмици след отбиването. Телесното тегло се измерва при раждането и при отбиването, а наддаването на тегло се изчислява седмично от 0 до 29 седмици след отбиването. Отговорът на глюкозата към глюкозната сонда (0,375 g глюкоза на ml, 5 g глюкоза на kg телесно тегло) се измерва на 18 седмици след отбиването. Плъховете се гладуват цяла нощ в продължение на 10 часа преди измерване на глюкозата. Взема се кръвна проба от опашната вена и базалната глюкоза веднага се тества с помощта на търговски глюкомер (MediSense Precision Xtra, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA). След измерване на глюкозата, концентрациите на глюкоза в кръвта се определят 15 и 60 минути по-късно и се изчислява допълнителната площ под кривата.

Колекция от тъкани

Целият мозък на плъхове бързо се отстранява след обезглавяване на 29 седмици след отбиването и веднага се замразява върху сух лед и след това се съхранява при -80 ° С. Мозъците се размразяват върху лед и дясната и лявата страна на хипоталамуса се дисектират отделно с помощта на метод, описан по-горе. 14 Оптичната хиазма се използва като демаркация на предната част на хипоталамуса. Това преминава през предната комисура, която е била използвана като хоризонтална граница. Линията между задния хипоталамус и телата на бозайниците се счита за каудален участък. Дисектираните хипоталамусни блокове съдържаха сложни преоптични, супраоптични, паравентрикуларни, предни, супрахиазматични, дорзомедиални, вентромедиални, дъговидни, бобовидни, задни и странични ядра. Дясната страна на хипоталамуса се използва за относителната експресия на гена, а лявата страна за статуса на метилиране на ДНК. Лявата страна на останалия мозък се използва за измерване на концентрацията на фолиева киселина. Събира се кръв от багажника и се центрофугира и се добавят плазмени проби с 0,5% аскорбинова киселина, за да се предотврати окисляването на фолиева киселина.

Експресия на хипоталамусен ген

Всеки дисектиран хипоталамус се хомогенизира, като се използва хомогенизатор за разкъсване на тъкани (Qiagen Tech., Mississauga, ON, Канада). РНК на хомогенизираните проби се изолира, като се използва реагент Trizol и се екстрахира с хлороформ съгласно протокола на производителя (Invitrogen, Grand Island, NY, USA) и се определя количествено, като се използва Nanodrop 1000. cDNA се синтезира с помощта на комплект с cDNA архив в ABI (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) Gene Amp PCR System 2700.