Намаляването на пшеницата при хранене понижава нивото на дезоксиниваленол в урината при възрастни във Великобритания

пшеницата

  • Обобщение
  • Въведение
  • Методи
  • Уча дизайн
  • Хранителни дневници
  • Екстракция на DON в урината
  • LC-MS анализ на извлечен DON
  • Анализ на креатинина
  • Статистически анализ
  • Резултати
  • Дискусия
  • Терминологичен речник

Обобщение

Методи

Уча дизайн

Изследването е проведено за период от 7 дни и включва 25 доброволци, 16 жени и 9 мъже, на възраст между 21 и 59 години. На 1 и 2 ден ("нормална диета") се поддържаха дневници със средно тежка храна и на 3 ден се получава празна проба от урина от първата сутрин. На 3–6-ия ден („намалена интервенция с пшеница“) доброволците бяха помолени да ограничат приема си от определен списък с храни, които е вероятно да съдържат пшеница (хляб, сладкиши, тестени изделия, зърнени закуски и др.) И замени с предмети от списък на предложените алтернативи (напр. ориз, картофи). На 5 и 6 ден хранителните дневници се поддържаха отново и се получава празна проба от урина през първата сутрин на ден 7. Информирано съгласие беше получено от всички доброволци преди проучването и етичното одобрение от Етичния комитет на NHS Research, Брадфорд, Великобритания. .

Хранителни дневници

Хранителните дневници бяха напълно кодирани с помощта на вътрешен пакет за анализ на диетата, базиран на Microsoft Access, като се използва UK Food Composition (Holland et al., 1992). За да се оцени спазването на интервенцията, честотата на консумация на определени групи храни (хляб, сладкиши, зърнени закуски и тестени изделия) по време на нормалната диета (дни 1 и 2) е сравнена с тази на интервенцията (дни 5 и 6). Освен това бяха изчислени специфични тегла на храната и беше определен прием на храна на базата на пшеница за всеки индивид въз основа на основните източници на пшеница (хляб, зърнени закуски, рула, тестени изделия, сладкиши и бисквитки). Други източници на пшеница се срещат в храната, например в сосове и сгъстители. Приносът му за общия прием на пшеница обаче е оценен от относително незначително значение.

Екстракция на DON в урината

Общият DON на урината беше измерен, като се използва модификация на метода на Meky et al. (2003) и използването на 13 C-DON (Biopure Referenzsubstanzen, Tulln, Австрия) като IS. IS е смес, съдържаща предимно 13 C 15 -DON (молекулна маса (M r) 311; 81.4%), но също така 13 C 14 -DON (M 310); 16,8%). Пригодността на това съединение като IS наскоро беше установена в LC-MS/MS анализ на зърнени култури, замърсени с DON (Haubl et al., 2006).

При нашия анализ на урината пробите бяха центрофугирани (2000 g; 15 минути; 4 ° C) и IS беше добавен към 4 ml урина, за да се получи крайна концентрация от 5 ng/ml. РН на всяка проба се регулира на 6,8 и се добавят 23 000 U β-глюкуронидаза (Escherichia coli тип IX-A; Sigma) в 1 ml 75 mM KH 2 PO 4 и се инкубира на водна баня с разбъркване в продължение на 18 часа. при 37 ° С. След разграждане пробите се центрофугират (2000 g; 15 минути; 4 ° С) и супернатантата се разрежда до 16 ml с PBS (рН 7,2). Разреденият материал се прекарва през DONtest ​​имуноафинитетни колони (IAC) (Vicam, Watertown, MA, USA), за да се извлече DON съгласно инструкциите на производителя. DON се елуира от колоните с 4 ml метанол и екстрактите се сушат под вакуум с помощта на Savant Speed ​​Vac и се разтварят в 250 ul 10% (v/v) етанол за анализ. Две аликвотни части от проба от урина с известни нива на DON също бяха добавени към IS и анализирани с всяка партида от тестови проби като контрол на качеството (QC).

LC-MS анализ на извлечен DON

DON се анализира чрез HPLC (Waters 2795 Separation Module, Milford, MA, USA) с MS детекция (Micromass Quattro Micro троен квадруполен масспектрометър, Манчестър, Великобритания). Разделянето на DON беше постигнато с помощта на колона Luna C18 (150 × 4.6 mm, размер на частиците 5 μm (Phenomonex, Macclesfield, UK). Подвижната фаза беше стартирана с 20% метанол и беше проведена изократно за 10 минути. Една фаза на измиване за 6 минути ). след това се провежда мин с използване на 75% метанол, след което 20% метанол се въвежда отново с равновесието на системата при тази концентрация за още 11 минути. Скоростта на потока е 1 ml/min, а обемът на инжектиране е 25 ul. Елуентът от HPLC колоната се насочва към MS дезолвационната камера и остатъкът се изпраща в отпадъци.