Mir-146a-5p потиска активирането и разпространението на чернодробни звездни клетки в

звездни

  • Субекти
  • Обобщение
  • Въведение
  • Резултати
  • Диференциална експресия на чернодробни miRNAs при мишки с фиброзиращ стеатохепатит
  • Базиран на микрочипове анализ на генна онтология и анализ на пътя за диференциално експресирани miRNAs
  • Валидиране на експресията на miRNA чрез количествена PCR в реално време (qRT-PCR)
  • miR-146a-5p беше регулиран надолу в активирани HSC инвитро
  • Свръхекспресията на MiR-146a-5p потиска пролиферацията на HSC
  • Ефекти на miR-146a-4p върху активирането на HSC и отлагането на колаген
  • miR-146a-5p действа директно върху 3'UTR на иРНК на Wnt1 и Wnt5a
  • miR-146a-5p регулират отрицателно Wnt1 и Wnt5a на ниво след транскрипция
  • Ефекти от свръхекспресията и инхибирането на miR-146a-5p върху целевите гени надолу по веригата на сигналния път Wnt
  • Нокдаунът на Wnt1 или Wnt5a инхибира генните експресии на сигнализация и фиброгенеза след Wnt
  • Дискусия
  • Методи
  • Животински модели на безалкохолен фиброзиращ стеатохепатит
  • Хистологичен анализ и биохимичен анализ.
  • Анализ на MicroRNA Microarray
  • QRT-PCR анализ
  • Идентифициране на потенциални миРНК цели
  • Изолация, култура и идентификация на HSC
  • Трансфекция на MiR-146a-5p в HSC
  • РНК интерференция и трансфекция
  • Имуноцитохимичен анализ.
  • Анализ на клетъчна пролиферация
  • Анализ на Western Blot
  • Анализ на активността на луциферазата
  • статистически анализ
  • Допълнителна информация
  • Допълнителна информация
  • PDF файлове
  • Допълнителна информация
  • Коментари

Субекти

  • Чернодробна фиброза
  • Безалкохолна мастна чернодробна болест

Обобщение

Въведение

Безалкохолният стеатохепатит (NASH) е част от спектъра на неалкохолната мастна чернодробна болест (NAFLD), характеризиращ се със стеатоза, лобуларно възпаление и прогресивна перицелуларна фиброза. При продължително чернодробно увреждане стеатохепатитът може да прогресира до чернодробна фиброза, характеризираща се с прекомерно натрупване на извънклетъчен матрикс (ECM). Чернодробните звездни клетки (HSC) играят централна роля в патогенезата на чернодробната фиброза 2. Неактивните HSC могат да се активират в отговор на хроничен стеатохепатит 3. Активираните HSC стимулират производството на колаген и натрупването на ECM, което води до появата на чернодробна фиброза 4. Въпреки фундаменталния напредък в разбирането на патофизиологията на фиброзиращия неалкохолен стеатохепатит, механизмите на фиброгенезата в присъствието на стеатохепатит остават неуловими.

Резултати

Диференциална експресия на чернодробни miRNAs при мишки с фиброзиращ стеатохепатит

Както е показано на фиг. 1, чернодробни участъци от мишки, хранени с MCD диета, показват нарушена лобуларна структура, макростеатоза в зона 3, точкова или фокална некроза на хепатоцити, възпалителна инфилтрация и перисинусоидална фиброза (фиг. 1А), която е придружена от значително по-висок серум Нива на ALT и AST (P 2 пъти) (Фиг. 1C).

( ДА СЕ ) Хистопатологични промени на чернодробни секции при мишки, хранени с диета и контрол на MCD. Оцветени с хематоксилин и еозин (отгоре) и трихроматизъм на Masson (отдолу). ( Б. ) Ефект на MCD диетата върху серумните нива на ALT и AST. ( ° С ) Диференциално регулирани miRNAs, идентифицирани чрез miRNA микрочипове. ( д ) Проверка на данните от микрочипове с помощта на RT-PCR в реално време. Тестовете бяха проведени в три екземпляра за всяка РНК проба и относителното количество на всяка miRNA беше нормализирано до U6 snRNA. Стойностите са средни ± SD, ** P

( ДА СЕ ) Анализ на GO категория, базиран на прогнозирани цели на всички диференцирано регулирани miRNAs. Вертикалната ос представлява категорията GO, а хоризонталната ос представлява обогатяването на GO. ( Б. ) Анализ на пътя за диференциално регулирани miRNAs. Показват се само маршрути с P

( ДА СЕ ) Представителни морфологични изображения и имуноцитохимично оцветяване на неподвижни и активирани HSC за десмин и α-SMA (400 ×). ( Б. ) експресията на miR-146a-5p беше изследвана чрез qRT-PCR в реално време. Стойностите са средни ± SD, ** P # P

( ДА СЕ ) Оцветяването с Desmin, показващо пролиферация на клетки LX-2 и HSC-T6, намалява, когато miR-146a-5p е свръхекспресиран. ( Б. ) miR-146a-5p инхибира растежа на LX-2 и HSC-T6 клетки, както се определя от анализите CCK-8. Стойностите са средни ± SD, * P

( ДА СЕ, ° С ) потенциални места за свързване на miR-146a-5p в 3'UTR на Wnt1 и Wnt5a. ( Б., д ) HEK-293T клетки бяха трансфектирани с луциферазен репортерен вектор, съдържащ див тип или мутантна 3'UTR форма на Wnt1 и Wnt5a, в присъствието на имитатори на miR-146a-5p, имитиращ контрол, инхибитор miR-146a -5p и контрол на инхибитора и след това се оценява за активността на репортер на луцифераза на 48 часа след трансфекцията. Стойностите са средни ± SD, * P # P # P ## P

( ДА СЕ ) нива на иРНК и протеини ( Б. ) на β-катенин, GSK-3β и NFAT5 при мишки, хранени с черен дроб с MCD диета и контроли. ( ° С ) HSC-T6 бяха трансфектирани с miR-146a-5p инхибитор или контрол на инхибитора, имитираха miR-146a-5p или имитираха контрол в продължение на 48 h. Нивата на иРНК и протеини ( д ) на β-катенин, GSK-3β и NFAT5 са анализирани съответно RT-PCR в реално време и Western blotting. За контрол на натоварването се използва control-актин. Стойностите са средни ± SD, ** P