Мастно-медиирана периваскуларна съдова дисфункция и ремоделиране през ampk mtor пътя в

мастно-медиирана

  • Субекти
  • Обобщение
  • Въведение
  • Методи
  • Химически продукти
  • Животни
  • Анализ на аортната съдова реактивност
  • Анализ на мезентериалната съдова реактивност
  • Клетъчна култура
  • Уестърн блотинг
  • Хистология
  • Статистика
  • Резултати
  • Ефекти на PVAT върху реактивността на аортата
  • Ефект на PVAT върху реактивността на мезентериалната артерия
  • HFD намалява активността на eNOS
  • Ремоделиране на аорти и PVAT при плъхове в HFD
  • Експресия на AMPK и mTOR в аорти на плъхове в HFD
  • Ефект на PVAT върху експресията на AMPK/mTOR в култивиран VSMC
  • Дискусия

Субекти

  • Клетъчна сигнализация
  • Мазнини
  • Затлъстяване
  • Съдови заболявания

Обобщение

Методи

Химически продукти

Фенилефрин (PE), ацетилхолин (ACh) и нитроглицерин (NTG) са закупени от Sigma-Aldrich (Taufkirchen, Германия).

Животни

Мъжки плъхове Wistar, на възраст от 6 до 8 седмици, са получени от Charles River (Sulzfeld, Германия). Плъховете са настанени в условия 12/12 h ден/нощ и на всички животни е дадена храна и вода ad libitum. Местният комитет за грижи и употреба на животните одобри всички процедури за грижи и употреба на животните. Изследването отговаря на Ръководството за грижа и използване на лабораторни животни, публикувано от Националния здравен институт на САЩ (NIH Publication No. 85-23, ревизиран 1996 г.). Животните са получавали стандартна хранителна диета (контролна група, n = 18) или HFD (HFD група, n = 18) в продължение на 6 месеца.

Анализ на аортната съдова реактивност

Анализ на мезентериалната съдова реактивност

Клетъчна култура

VSMC се получават от гръдни аорти на плъхове и се култивират, като се използва методът на тъканна експлантация, както е описано по-рано от нашата група. 27 периваскуларни адипоцити са получени от периаортна мастна тъкан и са култивирани, като се използва методът на тъканна експлантация, както е описано по-горе. 28 VSMC/адипоцитни кокултури са установени в присъствието или отсъствието на 10 μM съединение С, инхибитор на AMPK (Calbiochem, Сан Диего, Калифорния, САЩ), както е описано по-рано от противоположните страни на културните пластмасови вложки от порест полиетилен терефталат, който е имал ефективна културна площ от 0,3 cm 2, размер на порите 0,4 μm и плътност на порите 1 × 108 на cm 2 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA).

Уестърн блотинг

Хистология

Дебелината на аортната туника се определя съгласно установените техники. 29 Аортната тъкан беше фиксирана в 10% физиологичен разтвор, буфериран с формалдехид/фосфат и вградена в парафин. След рутинни хистологични процедури напречните сечения, проксимални до първата междуребрена артерия, бяха оцветени с Victoria Blue и Ponceau S и бяха изследвани при увеличение × 200. Изображенията бяха получени с цифров фотоапарат с помощта на микроскоп Nikon TE2000 (Nikon Corporation, Tokyo Japan). Средата на туниката беше определена като областта между вътрешните и външните еластични пластини, които бяха измерени в четири ортогонални точки на артериалните секции по време на три последователни аортни пръстена на животно с помощта на софтуера за изображения NIS-Elements 3.0 (Nikon Corporation).

Размерът на периаортната адипоцит е измерен, както е описано по-горе. 30 периаортни мастни тъкани бяха събрани от шест плъха, фиксирани с 10% буфериран формалин, вградени в парафин и оцветени с хематоксилин и еозин. Изображенията бяха заснети с помощта на микроскоп Nikon TE2000 (Nikon Corporation) и площта за общо 100 адипоцити, извлечени от всеки плъх, беше определена с помощта на софтуера за изображения NIS-Elements 3.0 (Nikon Corporation).

Статистика

Данните са средни ± sem. Полумаксималната ефективна концентрация на агонист (EC50) и максималният отговор (E max) са изчислени от индивидуалните криви на концентрация-отговор на агонист, използвайки GraphPad Prism 3.0 (Сан Диего, Калифорния, САЩ). Статистическите разлики в средните стойности бяха оценени с помощта на t-тест на Student или еднопосочен дисперсионен анализ с многократни сравнителни post hoc тестове на Bonferroni, според случая. Двустранните P-стойности под 0,05 се считат за статистически значими.