Инактивирането на фактора ap1 в надбазалния епидермис причинява увеличаване на

надбазалния

  • Субекти
  • Обобщение
  • Въведение
  • Резултати
  • Влияние на супрабазално инактивиране на фактор AP1 върху епидермалната морфология
  • Надбазалната експресия на TAM67 увеличава пролиферацията на кератиноцитите на базалния слой
  • Надбазалната експресия на TAM67 блокира образуването на тумор
  • TAM67 спрямо TPA: подобен фенотип
  • Дискусия
  • AP1 фактори: ключова роля в нормалния епидермис
  • Влияние на супрабазално инактивиране на активност на фактор AP1
  • материали и методи
  • TAM67 трансгенни мишки
  • Проучвания за канцерогенност
  • Антитела и имунологични методи.
  • Терминологичен речник

Субекти

  • Рак
  • Клетъчно разпространение
  • Онкогенеза

Обобщение

Въведение

Ние предположихме, че AP1 факторите изпълняват различни функции в базалния (пролиферативен) срещу супрабазалния (диференциращ) епидермис (Eckert et al., 2004). Тестването на тази хипотеза обаче се усложнява от факта, че практически всички членове на семейство AP1 са изразени, на някакво ниво, в базалното и надбазалното отделение (Welter and Eckert, 1995; Angel et al., 2001; Mehic et al. Al. ., 2005). В опит да разберат ролята на AP1 факторите в епидермалната канцерогенеза, Colburn и неговите колеги са използвали промотора K14, за да насочат експресията на TAM67 към основния слой на кератиноцитите (Young et al., 1999). TAM67 е доминираща отрицателна форма на c-jun, която взаимодейства екстензивно с всички AP1 фактори, за да инхибира трансактивацията (Brown et al., 1994). В тези интересни проучвания инактивирането на фактор AP1 в базалния слой не води до очевидни промени в пролиферацията на кератиноцити или външния вид на епидермиса или кожата; обаче мишките са по-малко податливи на прогресия на рака (Young et al., 1999; Thompson et al., 2002; Cooper et al., 2003).

Важна цел на настоящото проучване беше да се оцени ролята на AP1 факторите в супрабазалния епидермис. За да постигнем това, генерирахме мишки, при които TAM67 се експресира в надбазалните епидермални слоеве. Използваме индуцируема система, която позволява обратимо да активира експресията на TAM67 в надбазалния епидермис чрез прилагане на доксициклин (Dox) в питейна вода. Нашите експерименти показват, че супрабазалната експресия на TAM67 води до удебелен, хиперпролиферативен паракератотичен епидермис, но въпреки тази обширна хиперпролиферация епидермисът е устойчив на DMBA/TPA-зависимо туморно образуване.

Резултати

Влияние на супрабазално инактивиране на фактор AP1 върху епидермалната морфология

Изображение в пълен размер

Надбазалната експресия на TAM67 увеличава пролиферацията на кератиноцитите на базалния слой

Увеличението на дебелината на епидермиса може да се дължи на по-голямо оцеляване на клетките в супрабазалните слоеве, по-голяма адхезивност на клетките в стратифицираните слоеве или по-голяма пролиферация на базалните клетки. Първо тествахме дали супрабазалното инактивиране на фактор AP1 влияе върху пролиферацията на базалните кератиноцити. За да тестваме това, ние наблюдаваме включването на BrdU и нивото Ki67. Мишки, експресиращи TAM67, бяха третирани с BrdU в продължение на 2 часа и бяха подготвени тъканни срезове за откриване на BrdU и Ki67. Както е показано на Фигура 2а, броят на BrdU и Ki67 положителни ядра е пет пъти по-висок в TAM67 (+ Dox) положителен епидермис, което предполага, че увеличената пролиферация на базалния и надбазалния слой допринася за фенотипа.

Изображение в пълен размер

За по-нататъшно оценяване на въздействието на супрабазалната експресия на TAM67 върху клетъчната пролиферация и диференциация, ние наблюдавахме експресията на маркери за епидермална диференциация. Кератин К1, инволюкрин, филагрин и лорикрин обикновено се експресират в диференцирани супрабазални кератиноцити (Eckert et al., 1997). В TAM67-позитивния епидермис К1, инволукрин и филагрин показват нормална супрабазална експресия, което предполага, че кератиноцитите продължават да се подлагат на диференциация (Фигура 2b). Лорикринът, който обикновено присъства като дискретна лента в горния епидермис, се открива дифузно в множество супрабазални слоеве в TAM67-положителния епидермис (Фигура 2b). Освен това отсъствието на супрабазалната функция на фактор AP1 е свързано с намалени нива на инволукрин и лорикрин (Фигура 2в); което предполага, че супрабазалната функция на фактор AP1 е необходима за поддържане на експресията на тези гени.

Кератините К5 и К14 обикновено се експресират в базални кератиноцити; обаче при TAM67 положителни мишки се наблюдава експресия както в базалния, така и в надбазалния слой. Наличието на тези протеини в надбазалния епидермис е в съответствие с идеята, че клетките се забавят в диференциацията. Освен това открихме експресия на високо ниво на кератин К6, кератин, който не присъства в нормалния епидермис, но се открива в хиперпролиферативния епидермис (Sun et al., 1983).