Ефект на протеолитичните ензими и сексуалната абстиненция в биохимичното количествено определяне на
Ефекти на протеолитичните ензими и сексуални
абстиненция на нива на -глюкозидаза
в човешката семенна плазма
Patricio Peña S 1,2, Raúl Sánchez G, Белгия Vasquez P 1,3,
Клаудия Кастило К 1, Вернер Миска 4
Получено на 18 декември 2000 г. Прието в коригирана версия на 16 януари 2001 г.
Източник на финансиране: Програма MECE-SUP FRO-98, Проект: "Укрепване на
Регионален научен, технологичен и производствен капацитет. "Дирекция" Изследвания "
(9735-9820), Universidad de La Frontera Temuco и DFG-GTZ-93.2157.106.100.
Катедра за фундаментални науки, Катедра за предклинични науки и Център за биотехнологии в репродукцията, Медицински факултет, Университет де Ла Фронтера, Темуко, Чили.
Андрологичен отдел, J-L-Universität Giessen, Германия.
1 медицински специалист, 2 MCS, 3 бакалавърска степен
Това проучване е проектирано със следните цели: 1) да се получат референтни стойности на α-глюкозидаза, присъстваща в семенната плазма на нормални донори. 2) определя в пробите от сперма от нормални донори ефекта от добавянето на протеолитичния ензим а-химотрипсин върху активността на а-глюкозидазата; и 3) да се оцени възможният ефект от продължителността на сексуалното въздържание върху активността на α-глюкозидазата в серийни проби на пациенти от Програмата за криоконсервация на спермата.
МАТЕРИАЛ И МЕТОД
След консултация и одобрение от Комитета по етика на Медицинския факултет, чрез информирано съгласие, бяха избрани донори за това проучване сред студенти от нашия университет и пациенти, които са посещавали андрологичната поликлиника, като се изключват от нея субекти с предишни заболявания и предаване по полов път. Оценката на α-глюкозидазата е рутинно определяна в семенната плазма от пациенти, изискващи криоконсервация на сперматозоиди.
Ефект на α-химотрипсина върху активността на α-глюкозидазата. Нарастващи концентрации (от 0,1 до 10 mg/ml) на α-химотрипсин 18 се добавят към семенни плазмени проби от нормални донори (n = 6), които се поддържат при -20 ° C до анализа. Впоследствие активността на α-глюкозидазата беше количествено определена. Базовата стойност на всеки донор беше предварително определена и считана за 100%, която трябва да бъде сравнена със стойностите, получени от пробите, към които е добавен -химотрипсин.
Мониторинг на α-глюкозидаза в серийно получени семенни плазмени проби. Серийни проби бяха събрани от 9 пациенти чрез програмата за криоконсервация на сперматозоиди на андрологичната лаборатория, UFRO. Пробите бяха групирани в три групи: № 1 съответстваше на въздържание от 2 дни, № 2 до 4 дни и № 3 до 6 дни от началото, но всички бяха взети последователно, по такъв начин, че между тях, въздържанието винаги е съответствало на 2 дни. Обработката на семенната плазма е както е описано по-горе.
Определяне на референтни стойности. При нормални донори активността на неутралната α-глюкозидазна изоформа е 14,52 до 25,9 µU/ml (= 19,32 µU/ml; SD = 1,13; SEM = 0,16) чрез параметрични методи. Нормалният диапазон варира между 15,85-23,46 µU/ml в случай на непараметрични методи (Фигура 1).
Ефект на протеолитичните ензими. Използването на а-химотрипсин при повишаване на концентрациите от 0,1 до 10 mg/ml не променя значително активността на а-глюкозидазата (Фигура 2). Като се има предвид, че концентрации до 10 пъти нормално препоръчителните (1 mg/ml) са използвани за разтваряне на семенната плазма при пациенти с нарушено втечняване.
Анализът на семенната плазма предоставя важна подкрепа за диагностицирането на различни патологии, които засягат мъжката репродуктивна система 19. Количественото определяне на присъствието на ензима а-глюкозидаза корелира директно с функцията на епидидима. Следователно нивата над референтните стойности биха били пряко свързани с пациенти с инфекция, а ниските нива предполагат обструкция или агенеза на семепровода, със стойности, близки до тези, представени от пациенти с вазектомия. За да се приложи правилно тази техника в клиничната лаборатория, беше необходимо да се определят нормалните референтни стойности на чилийското население. При 50 проби от доброволци с нормален семенна анализ е приложен параметричният статистически метод, който с малък размер на пробата 17 може да бъде приложим за цялата изследвана популация. Резултатите, получени от нормална средна стойност от 19,32 µU/ml (SD = 1,13; SEM = 0,16), бяха много сходни с тези, описани за европейската популация (20 µU/ml) 16 .