Cadherin-17 е полезен диагностичен маркер за аденокарциноми на храносмилателната система -

диагностичен

  • Обобщение
  • Главен
  • материали и методи
  • Проби от тъкани
  • Тъканни матрици
  • Анализ на Western Blot
  • Имунохистохимично оцветяване
  • Резултати
  • Дискусия

Обобщение

Главен

Ракът на неизвестен първичен сайт е седмият до осмият най-често срещан рак в клиничната практика. 1 Годишната честота, коригирана с възрастта на 100 000 население, е от 7 до 12 случая в САЩ, 18 в Австралия и 6 в Холандия. Това е четвъртата най-честа причина за смърт от рак както при мъжете, така и при жените. 2 Тъй като оптималното лечение на рака е свързано с мястото на първичния тумор, липсата на идентифициране на първичното място създава значителни проблеми по време на лечението на пациентите. Аденокарциномите представляват почти половината от всички неизвестни първични ракови заболявания. Използването на имунохистохимия за откриване на специфични антигени върху туморни клетки доведе до значително подобрение в диагностиката на раковите заболявания. Например, специфичен за простатата антиген се използва като маркер за рак на простатата. 3 Транскрипционният фактор на щитовидната жлеза е маркер за рак на белия дроб. 4 Все още обаче липсва добър маркер за стомашно-чревни (GI) тумори.

Кадхерин-17, наричан още чернодробно-чревен кадхерин или човешки пептиден транспортер-1, е член на суперсемейството на кадхерин и е адхезионна молекула, зависима от Са2 +. 5, 6 За разлика от така наречените класически кадхерини, като E, N и P кадхерини, кадхерин-17 има седем повторения на кадхерин вместо пет в извънклетъчния домен и само 20 аминокиселинни остатъка в цитоплазмения домен. Значително късият цитоплазмен домен няма хомология с други кадерини и адхезивната функция на кадхерин-17 не зависи от асоциацията с други цитоплазмени протеини. 7 Клетъчното разпределение на кадхерин-17 също се различава от класическите кадхерини. В чревните епителни клетки Е-кадхеринът е концентриран в прилепналите връзки, докато кадхерин-17 е равномерно разпределен по страничната контактна зона. 8

Разпределението на тъканите на кадхерин-17 се различава по видове. При плъхове кадхерин-17 се експресира в черния дроб и чревните епителни клетки. При хора и мишки експресията е ограничена до чревни епителни клетки и не се открива в черния дроб. 9 Ограниченото разпределение на 17-кадхерин в нормалните тъкани предполага, че той може да бъде полезен маркер за идентифициране на първични туморни места. Съобщава се, че Cadherin-17 се изразява в колоректален рак, рак на стомаха, 11, 12 и панкреас. 13 Не е известно дали се изразява в тумори в други органи.

Следователно, в това проучване ние изследвахме експресията на кадхерин-17 в тумори, получени от различни места в тялото, използвайки тъканни матрици. Установихме, че кадхерин-17 е дифузно и силно експресиран в колоректални аденокарциноми, разпръснат експресиран в аденокарциноми на стомаха, панкреаса и жлъчния канал и практически не е експресиран в тумори другаде в тялото. Нашето проучване показва, че кадхерин-17 може да бъде полезен маркер за идентифициране на първични места на метастатични аденокарциноми.

материали и методи

Проби от тъкани

Фиксирани с формалин, вградени в парафин тъканни блокове са получени от 518 преди това характеризирани първични карциноми и 60 нетуморни тъкани от архивите на Катедрата по патология, Национална болница на Тайванския университет. Изследването е проведено в съответствие с насоките на нашия институционален съвет за преглед. Тези случаи на тумор включват 44 рака на гърдата, 39 цервикални карциноми, 33 холангиокарциноми, 47 колоректални карциноми, 57 хепатоцелуларни карциноми, 50 рак на белия дроб, 47 бъбречно-клетъчни карциноми, 89 рак на яйчниците, 28 рак на панкреаса, 39 рак на бъбреците. рак Спектърът на изследваната нетуморна тъкан е посочен в таблица 1.

Таблица в пълен размер

Тъканни матрици

Целевите области на тъканите бяха маркирани върху оцветени секции H и E. За всеки случай се отстранява 2 mm тъканна сърцевина с помощта на ръчно устройство за тъканна матрица (Beecher Instruments, Silver Spring, MD, USA) и се вкарва в рецепторен парафинов блок. Събраните тъкани се нарязват на филийки с дебелина 4 μm и се поставят върху позитивно заредени предметни стъкла.

Анализ на Western Blot

Уестърн петна се извършват върху протеинови лизати от 11 представителни нормални и туморни тъкани, включително бъбреци, черен дроб, дебело черво, тънки черва, стомах, далак, щитовидна жлеза, панкреас, плацента и карциноми на яйчниците и белите дробове. Подобни количества от общия протеин от всеки лизат се разделят с използване на поликриламидни гелове Tris-глицин-SDS-8% (Novex, Сан Диего, Калифорния, САЩ) и след това се прехвърлят в мембрани от поливинилиден дифлуорид на Impobilon-P от Millipore. Мембраните бяха сондирани с миши моноклонални анти-кадхерин-17 антитяло, клон 1H3 (IgG1), в концентрация 1 μg/ml (Abnova, Тайпе, Тайван), последвано от конюгирана с пероксидаза кози антимиши имуноглобулин (1: 2500 ). Western blots са разработени с помощта на хемилуминесценция (Pierce, Rockford, IL, USA).

Имунохистохимично оцветяване

Тканевите секции бяха депарафинизирани и рехидратирани. Възстановяването на антигена се извършва чрез инкубиране на предметните стъкла в 0,01 М буфер с лимонена киселина (рН 6,0) при 100 ° С за 10 минути. След блокиране с 3% H2O2 и 5% фетален говежди серум, предметните стъкла реагираха с моноклонално антитяло срещу кадхерин-17 (клон 1H3, Abnova), цитокератин 7 (DakoCytomation, Glostrup, Дания), цитокератин 20 (DakoCytomation) или CDX -2 (Biogenix, Сан Рамон, Калифорния, САЩ) при разреждане 1: 100 при 4 ° С за една нощ. Слайдовете се инкубират с полимер-HRP реагент (BioGenex). Пероксидазната активност се визуализира с разтвор на диаминобензидин тетрахидроксихлорид (BioGenex). Срезите бяха оцветени с хематоксилин. Тъмнокафявото мембранно оцветяване беше определено като положително и нито едно оцветяване не беше определено като отрицателно. За отрицателни контроли заменихме първичното антитяло с 5% фетален говежди серум. Оцветяването се оценява по следния начин: 0 (няма откриваемо оцветяване); 1+ (75%). В клетките с положително оцветяване оцветяването е интензивно и еднородно, поради което интензитетът не се взема предвид в резултата.