Аберантната експресия на тирозин киназата на рецептора на мер допринася за левкемогенезата в

киназата

  • Субекти
  • Обобщение
  • Въведение
  • Резултати
  • Mer е невярно изразено в AML
  • Mer активира клетъчното оцеляване и антиапоптотичните пътища
  • Инхибиране на Mer с нокдаун на Mer shRNA
  • Инхибирането на Mer с помощта на shRNA намалява фосфорилирането на p38, ERK и CREB
  • Инхибирането на Mer предизвиква миелобластна апоптоза инвитро
  • Мер инхибирането намалява миелобластната пролиферация инвитро
  • Повторното въвеждане на Mer спасява способността на миелобластите да избягват апоптозата и да образуват колонии
  • Мер инхибирането увеличава преживяемостта без левкемия in vivo
  • Дискусия
  • Допълнителна информация
  • Файлове с изображения
  • Допълнителна фигура S1
  • Word документи
  • Допълнителна таблица S1
  • Допълнителна таблица S2
  • Допълнителна таблица S3
  • Допълнителни фигури и таблици Легенди

Субекти

  • AML
  • Онкогенни протеини
  • Онкогенеза
  • Отстраняване на грешки в тази статия е публикувано на 5 септември 2016 г.

Обобщение

Последните изследвания в AML разкриха само няколко отклонени експресирани или мутирали протеинкинази, които служат като потенциални терапевтични цели. Високото съотношение на алелите на мутацията на дублиране на FLT-3 в тандем е свързано с лоша прогноза и са разработени инхибитори на малки молекули, насочени към клетки, експресиращи FLT-3. 6,7 Положителен AML C-Kit, открит при голям брой рецидивиращи пациенти, е свързан с лоша прогноза и е насочен и към инхибитори на малки молекули. 8,9 Необходими са по-целенасочени терапевтични възможности, за да се осигури по-ефективно лечение на AML или да се позволи намаляване на високоинтензивната химиотерапия.

В този ръкопис съобщаваме, че Мер е аберативно свръхекспресиран в повечето проби от педиатрични и възрастни пациенти с ОМЛ, в сравнение с нормалните миелоидни предшественици. Mer също се изразява в по-голямата част от AML клетъчни линии. Активирането на Mer в AML клетъчни линии води до сигнализиране за оцеляване и пролиферация, включително фосфорилиране на ERK1/2 и AKT, както и p38 MAPK (p38), MSK1, CREB, ATF1 и STAT6. И накрая, ние показваме, че инхибирането на Mer чрез РНК интерференция в човешки AML клетъчни линии води до значително увеличаване на апоптозата, намален потенциал за образуване на колонии и забавяне на развитието на левкемия при имунокомпрометирани мишки. Терапевтичното насочване на аберрантна експресия на Mer в AML е атрактивно, потенциално позволяващо по-добри резултати при високорискови пациенти, комбинирана терапия с намалена интензивност при пациенти с нисък риск или терапевтична възможност за тези, които не могат да понасят високорисковата химиотерапия.

Резултати

Mer е невярно изразено в AML

За да оценим експресията на Mer в AML, ние оценихме 14 различни миелоидни клетъчни линии. Mer е открит чрез имуноблотинг в повечето от клетъчните линии, анализирани като 150-180 kD протеин (варирането на размера се дължи на диференциално гликозилиране 18). Проточен цитометричен анализ потвърди констатациите; клетките, които бяха положителни за Mer, демонстрираха по-висока интензивност на флуоресценция в сравнение с клетките, оцветени с контрола на изотипа на миши имуноглобулин G1, докато клетките отрицателни не (Фигура 1 и допълнителна таблица S1). Нашият анализ разкри висока степен на корелация между резултатите от имуноблот и поточна цитометрия и показа, че има известна степен на експресия на Mer в 86% (12 от 14) от AML клетъчните линии. В този анализ на клетъчната линия експресията на Mer не е свързана с класификация на френско-американско-британски (FAB) или Световната здравна организация (СЗО), цитогенетична аномалия, възраст на пациента, от която е получена клетъчната линия, нито е свързана с Други известни клинични характеристики (допълнителна таблица S1).

Mer се изразява в AML клетъчни линии. ( да се ) Цели клетъчни лизати, получени от AML клетъчни линии, бяха подложени на имуноблот анализ с анти-Mer антитяло. Това представително петно ​​показва откриването на протеина Mer (150-180 kD) в няколко AML клетъчни линии. Актинът беше открит като контрола на натоварването. ( б ) Експресията на Mer на клетъчната повърхност се определя чрез поточна цитометрия след оцветяване с първично анти-човешко антитяло Mer и PE-конюгирано вторично антитяло (сива хистограма). Неспецифичното оцветяване се определя с използване на IgG1 изотипно контролно първично антитяло и PE-конюгирано вторично антитяло (бяла хистограма). Показани са представителни Mer отрицателни (HL-60) и Mer положителни (KG-1) клетъчни линии.

Изображение в пълен размер

Mer се изразява в повечето диагностични проби от костен мозък, получени от пациенти с ОМЛ, но не и в нормален костен мозък. Миелобластите, събрани при диагностицирането на пациенти с ОМЛ, се анализират чрез поточна цитометрия за експресията на Mer. ( да се ) Клетки, експресиращи човешки CD33 и CD45 се анализират след оцветяване с миши анти-човешко антитяло Mer и PE-конюгирано вторично антитяло за експресия на Mer (сива хистограма). Неспецифичното оцветяване се определя с използване на антитяло за контролиране на изотип на IgG1 на мишка и PE-конюгирано вторично антитяло (бяла хистограма). Представени са представителни профили на поточна цитометрия за Mer-положителни (> 20% положителни клетки), Mer-dim (10-20% положителни клетки) и Mer-отрицателни (