Типизиране с висока разделителна способност на hla клас I и II и ctlp честота при недонорни трансплантации

Обобщение

Достъпът е предоставен от

Главен

В сравнение с генотипно HLA-идентична трансплантация на костен мозък (BMT), несвързаният донорен трансплантат (URD) е свързан с по-висока смъртност. Тежката остра болест присадка срещу гостоприемник (aGVHD) и неуспехът на присадката са водещите причини за свързаната с трансплантацията смъртност (SMI) в тази обстановка и могат да бъдат свързани със степента на HLA несъвместимост.

В допълнение към молекулярното типизиране са разработени клетъчни тестове, за да се предскаже въздействието на несъответствията от HLA клас I върху вероятността за aGVHD. Те се състоят от определяне на честотата на донорните Т-клетъчни цитотоксични предшественици (CTLp) с антирецепторна специфичност (посока GVHD) .17 Ниските честоти на CTLp силно корелират с HLA-A и -B съвместимостта.

Тъй като употребата на URD-BMT се е увеличила с увеличаването на размера на донорските регистри, спешно са необходими повече данни по тази тема, за да се подобри клиничната практика, а ретроспективната оценка на предишния опит остава необходима за всеки клиничен екип от BMT. Целта на това проучване е да се определи въздействието на несъответствията от HLA клас I и II върху изхода на пациента след URD-BMT. Пренаписахме HLA клас I и II, използвайки ДНК техники с висока резолюция, в 69 двойки донори и реципиенти, трансплантирани между септември 1988 г. и юни 1998 г. в нашата институция. Честотите на CTLp също бяха определени в 33 от тези двойки.

материали и методи

BMT процедура

69-те последователни процедури за URD-BMT, извършени между септември 1988 г. и юни 1998 г. в университетската болница „Анри-Мондор“, са включени в изследването (Таблица 1). Три пациенти са присадени два пъти. Донорите бяха идентифицирани чрез европейските регистри и NMDP. Основните характеристики на пациентите преди BMT са обобщени в таблица 1. Пациентите са разделени на две групи според състоянието на заболяването в BMT: 32-те реципиенти с ХМЛ в първата хронична фаза или острата левкемия в първата. стандартната рискова група, а 37-те пациенти с по-напреднало заболяване при BMT формират високорисковата група.

Таблица в пълен размер

Първите 66 процедури за BMT са извършени след миелоаблативно кондициониране, включително общо облъчване на тялото (n = 59) или режим на базата на бусулфан (n = 7). Трите втори присадки с различен донор са извършени след прокарбазин: циклофосфамид и антитимоцитен глобулин. Профилактиката на GVHD комбинира циклоспорин и метотрексат съгласно протокола от Сиатъл.18 Всички пациенти са получили немодифициран костен мозък. Острият GVHD е класифициран, както е дефинирано от Glucksberg et al. 19 и се лекува със стандартни дози стероиди, последвани, в случай на неуспех, от високи дози стероиди или ATG.

HLA типизиране и сравнение между пациент и донор

HLA Pre-BMT типизиране:

Донорите бяха избрани въз основа на HLA-A и -B типизиране, използвайки техниката на микролинфитотоксичност20, идентифицирайки съответните специфики, признати от Световната здравна организация (СЗО) по време на трансплантацията. Типирането на HLA клас II се извършва с техниките, налични по време на трансплантацията. Следователно, HLA-DR и -DQ фенотипите са изследвани при ниска разделителна способност в 14 двойки чрез серология (n = 3) или RFLP (полиморфизъм на дължината на рестрикционен фрагмент) (n = 11), докато в останалите 55 двойки, HLA-DRB1 - Типизирането на DQB1 и -DPB1 се извършва при висока разделителна способност, използвайки PCR-dot dot blot (Innogenetics, Брюксел, Белгия) плюс PCR-RFLP2122 за HLA-DRB1 и -DQB1.

HLA ретроспективно писане:

Типирането на HLA клас I се извършва ретроспективно от PCR-SSP (грунд, специфичен за последователността) (Dynal, Осло, Норвегия).

Серологичните "заготовки" на HLA-A и HLA-B бяха пренаписани с ДНК типиране с ниска разделителна способност. Всички серологично експресирани HLA-A антигени са определени на алелно ниво. Серологично експресираните HLA-B антигени бяха дефинирани с висока разделителна способност в зависимост от наличността на търговски комплекти (HLA-B фенотипът беше напълно дефиниран при висока разделителна способност при 39 от 69 двойки донори-реципиенти). Локусът на HLA-C е изследван с помощта на техника, която определя алелите Cw1-18.

HLA-DRB1, -DQB1 и -DPB1 бяха пренаписани в 14 двойки донор-реципиент, които преди това бяха записани с ниска резолюция.

Изчисляване на честотите на CTL-p

CTLp анализите се провеждат, както е описано от Kaminski et al. Накратко, анализите се провеждат в "посока на GVHD", като донорните клетки се използват като клетки-респонденти, а клетките реципиенти като стимулиращи клетки. Ямките бяха оценени положително, ако тяхното освобождаване от 51 Cr е по-голямо от средното плюс 3 стандартни отклонения (SD) от отрицателния контрол (стимулиращи клетки без отговарящи клетки). Честотите на CTLp под 1/300000 се считат за отрицателни

статистически методи

Данните бяха събрани и актуализирани към 15 ноември 1998 г., осигурявайки минимално проследяване на пациент от 7 месеца, максимум 122 месеца и средно проследяване на оцелелите от 29 месеца (диапазон 7-122 месеца). Очакваните вероятности за aGVHD, MRT и оцеляването бяха изчислени и начертани с помощта на метода на Kaplan-Meier и сравнени с помощта на log-rank тест. Пациентите, подложени на втора трансплантация, бяха цензурирани за първата трансплантация на датата на втората BMT.

Резултати

HLA типизиране и pCTL честоти

По време на трансплантацията беше известно, че шест двойки донори и реципиенти не са аналогични за HLA-A или -B антиген (UPN 671, 588, 536, 620, 629, 643); две двойки са несъответствия HLA-DQB1 (UPN 495, 547) и една двойка са несъответствия HLA-A и -DQB (UPN 502) (Таблица 2).

Таблица в пълен размер

Ретроспективно типизиране на ДНК потвърди всички серологично идентифицирани несъответствия. Допълнителни несъответствия бяха открити в седем от деветте известни несъответстващи двойки донор-реципиент (Таблица 2). Сред останалите 60 двойки донори и реципиенти, неидентифицирани HLA несъвместимости по време на трансплантацията са открити при 27/60 (45%), докато 33/60 (55%) двойки са потвърдени за HLA съвпадение. A, -B, -C, -DRB1 и -DQB1 алели. Следователно, след ретроспективно типизиране, общо 36/69 (52%) двойки дарители и получатели не съвпадат. Сред тези двойки само 27 не съответстват на антигени от HLA клас I, пет единични двойки не съответстват на антигени HLA клас II и четири не съответстват на антигени HLA клас I и клас II.