Мониторинг на кръвен фенилаланин за спазване на диетата сред пациенти с

мониторинг

  • Обобщение
  • Главен
  • МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ
  • Участници в проучването
  • Кръвни проби
  • Анализ на плазмените аминокиселини чрез AAA
  • Анализ на аминокиселини на изсушени кръвни петна чрез HPLC с флуорометрично откриване
  • Анализ на аминокиселини на тандемни сухи кръвни петна от MS/MS
  • Диетична оценка
  • статистически анализ
  • РЕЗУЛТАТИ
  • ДИСКУСИЯ

Обобщение

Цел: Мониторингът на фенилаланин в кръвта е от решаващо значение за лечението на фенилкетонурия. Сравнихме три метода за измерване на концентрацията на фенилаланин в кръвта: анализатор на аминокиселини, високоефективна течна хроматография с флуорометрично детектиране и тандемна мас спектрометрия.

Методи: Проучихме 22 пациенти с фенилкетонурия на възраст от 12 до 48 години, които са посещавали нашия метаболитен лагер. Кръвта се събира в хепаринизирани епруветки (за анализ от аминокиселинния анализатор) или филтърна хартия (за анализ чрез високоефективна течна хроматография с флуорометрично откриване и тандемна мас спектрометрия).

Резултати: Плазмените концентрации на фенилаланин в кръвта, измерени от анализатора на аминокиселини, са значително по-високи от тези, получени от пълна кръв върху филтърна хартия чрез високоефективна течна хроматография (разлика: 102 μM; 95% доверителен интервал: 23, 181) и тандемна мас спектрометрия ( разлика: 137 μM; 95% доверителен интервал: 58, 216). Концентрациите на фенилаланин от високоефективна течна хроматография и тандемна масспектрометрия не се различават значително (P = 0,5).

Заключения: Когато наблюдават концентрациите на фенилаланин в кръвта за спазване на диетата, клиницистите трябва да вземат предвид използвания метод; Тестовете за пълнокръвна филтърна хартия са постоянно приблизително с 15% по-ниски от плазмените тестове.

Главен

Фенилкетонурията (PKU) е вродена метаболитна грешка, която е резултат от рецесивна генетична мутация, обикновено в гена, който кодира фенилаланин хидроксилаза, ензим, отговорен за хидроксилирането на аминокиселината фенилаланин (Phe) до тирозин (Tyr), което е важно междинен в производството на невротрансмитери. Ако PKU не се лекува, Phe метаболитите се натрупват и невротрансмитерите намаляват, което води до умствена изостаналост, поведенчески разстройства и гърчове. Тези отрицателни ефекти обаче могат да бъдат успешно предотвратени с диетично лечение, ако се започне през първите дни от живота, поради което сега всички държави включват PKU в своите скринингови панели за новородени.

Въпреки че няма универсални насоки, общоприетият подход за управление на ФКУ е строга диета, която включва количеството непокътнат протеин, необходимо за поддържане на концентрациите на Phe в кръвта в обхвата на лечение и допълване с метаболитна формула без Phe (т.е. медицинска храна) така че концентрациите на Phe в кръвта да не надвишават 360 μM (6 mg/dL; за преобразуване на μM в mg/dL, разделяне на 60) поне до 6 години. 1 По-ниските концентрации на Phe са свързани с нормални когнитивни способности при юноши и възрастни, което показва, че оптимални резултати могат да бъдат получени, когато нивата на Phe се поддържат на 120-360 μM до 12 години и 120-900 μM от този момент нататък. 2 Строгият контрол на концентрацията на Phe в кръвта също е от решаващо значение по време на бременност; дете, родено от майка, чиято ФКУ не е под метаболитен контрол, може да страда от умствена изостаналост, микроцефалия и вродена сърдечна недостатъчност. 3

Стремежът към съобразяване с диетата през целия живот означава критична нужда от прости, бързи и точни методи за проследяване на концентрациите на Phe в кръвта. Един прост скрининг метод за PKU при новородени, Guthrie Bacterial Inhibition Assay, 4 се използва повече от четири десетилетия. Оттогава са разработени няколко нови метода, включително аминокиселинен анализатор (AAA), флуорометрия, 5 високоефективна течна хроматография (HPLC), 6, 7 и тандемна мас спектрометрия (MS/MS). 8, 9 Тези нови техники се оказаха жизненоважни за подобряване на точността и скоростта, с които може да се извърши скрининг на новородено, 10, 11, но малко проучвания са изследвали валидността на тези методи за количествен анализ на концентрациите. Абсолютни нива на Phe в кръвта необходими за наблюдение на пациента.

Пациентите с ПКК се различават по отношение на количеството си активен ензим, вкусовите предпочитания към медицинските храни и желанието да се придържат към предписана диета. Всички тези фактори правят лечението силно индивидуализирано и наблюдението е критично. В отдела по медицинска генетика на университета Емори редовно виждаме пациенти с ПКУ в метаболитни клиники и в годишен летен лагер, където ААА взема и тества кръв. Между тези посещения пациентите извършват домашни убождания, оцветяват кръвта си върху филтърна хартия и изпращат пробата в нашата клиника, където тя се анализира от HPLC или отскоро от MS/MS. Тъй като същият пациент е вероятно да тества кръвта си, използвайки AAA и HPLC или MS/MS, или евентуално и трите метода, използвани в момента в нашите лаборатории, ние се интересувахме от сравнението на концентрациите на Phe в кръвта, получени от тези три метода. Следователно, нашата цел беше да анализираме как трите метода (плазмен AAA и HPLC и филтърна хартия цяла кръвна петна MS/MS) се сравняват за проследяване на концентрациите на Phe в кръвта.

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

Участници в проучването

Метаболитният лагер за момичета в университета Емори е създаден през 1994 г., за да отговори на нуждите на подрастващите, които трябва да се справят с поддържането на ограничителна диета и желаната концентрация на Phe в кръвта им. 12 Момичета подрастващи бяха нападнати първи, поради потенциално вредните ефекти на лошия метаболитен контрол в тяхното потомство; Най-новите ни лагери бяха разширени, за да включват жени от различни възрасти. Кемперите прекарват една седмица, живеейки в къща в кампуса с изследователи на метаболизма и диетолози, които служат като „лагерни съветници“. Дейностите в лагера включват PKU и диетично обучение, класове за готвене, приготвяне на медицинска храна, нови мостри за добавки и социални излети. Получихме данни за този анализ от участници в едноседмичен лагер през 2004 г .: 25 момичета и жени на възраст от 12 до 48 години.