Модулация на стомашно-чревната физиология от пробиотични щамове на Lactobacillus casei и

физиология

В
В 		В

Моят SciELO

Персонализирани услуги

Списание

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Член

  • Испански (pdf)
  • Статия в XML
  • Препратки към статии
  • Как да цитирам тази статия
  • SciELO Analytics
  • Автоматичен превод
  • Изпратете статия по имейл

Индикатори

  • Цитирано от SciELO
  • Достъп

Свързани връзки

  • Цитирано от Google
  • Подобно в SciELO
  • Подобно в Google

Дял

Анали на здравната система на Навара

печатна версия В ISSN 1137-6627

Anales Sis San Navarra В том 29 В № 3 Памплона Септември/Декември 2006

ОРИГИНАЛНИ ПРЕДМЕТИ

Модулация на стомашно-чревната физиология от пробиотични щамове на Lactobacillus casei и Bifidobacterium bifidum

Модулация на стомашно-чревната физиология чрез пробиотични щамове Lactobacillus casei и Bifidobacterium bifidum

J. Barrenetxe 1, P. Aranguren 1, A. Grijalba 2, J.M. MartГnez-PeГ ± uela 3, F. 1 март и E. Urdaneta 1

1. Лаборатория по физиология и хранене. Катедра по природни науки за околната среда. Обществен университет в Навара. Памплона.
2. Служба по биохимия. Болница Навара. Памплона.
3. Патологична анатомична служба. Болница Навара. Памплона.

Този изследователски проект е финансиран с гранта Ortiz de Land Landzuri от здравния департамент на правителството на Навара.

Ключови думи. Пробиотични щамове. Черво. SGLT1. PEPT1.

Ключови думи. Пребиотични щамове. Черво. SGLT1. PEPT1.

Въведение

Следователно целта на настоящата работа е да се проучи дали приемът на диети, допълнени с всеки от тези пробиотици (L. casei или B. bifidum) засяга развитието на животните и особено чревната функция, по-специално имунната, храносмилателната и абсорбционната. Тези резултати ще бъдат решаващи, за да се използват впоследствие тези микроорганизми като терапия при различни патологични ситуации.

Получаване и отглеждане на бактериални щамове

Животни и диети

Швейцарски мишки (Charles River Laboratory Animals, Барселона) от 28 дни и 20 g първоначално телесно тегло бяха разпределени на случаен принцип във всяка от трите експериментални групи (n = 30-20): контрол (C), Bifidobacterium bifidum (Банда Lactobacillus casei (L). Те бяха поставени в клетки (n = 5) в стая с постоянна температура (22 ± 2 ° C) и влажност и контролиран фотопериод от 12 часа светлина и 12 часа тъмнина.

Хистологичен анализ

Взетите за хистологично изследване проби от дебелото черво веднага се фиксират в 4% формалин за 24 часа. След това те бяха дехидратирани и след включването им в парафин бяха нарязани на парчета от 5 mm и оцветени в хематоксилин-еозин за по-късен микроскопски анализ.

Получаване на VMBC на червата на мишката

Лигавицата се ресуспендира в среда, съдържаща 100 mM манитол и 2 mM N-2-хидроксиетилпиперазин-NV'-2-етансулфонова киселина (HEPES) при рН 7,1 с трис-хидроксиметил-аминометан. Суспензията се хомогенизира в хомогенизатор Potter-Elvehjem (Braun, Melsungen, Германия) при 3000 оборота в минута при 4 ° С за 1 минута. След това се прибавя MgCl2 до крайна концентрация от 10 mM и сместа се инкубира в продължение на 20 минути на студено и непрекъснато разбъркване. След това се центрофугира при 2000 х g за 15 минути и супернатантата се събира и центрофугира при 27 000 х g за 30 минути. Така получената пелета се ресуспендира в среда, образувана от 100 тМ манитол, 0,1 тМ магнезиев сулфат и 2 тМ HEPES при рН 7,4 с Tris.

Накрая, сместа се центрофугира при 27 000 х g в продължение на 30 минути и гранулата се ресуспендира в среда, съдържаща 300 тМ манитол, 0,1 тМ магнезиев сулфат и 10 тМ HEPES при рН 7,4 с Tris.

Проба от така получената суспензия беше използвана за определяне от Брадфорд на количеството присъстващ протеин и измерване на активността на захаразата (EC3.2.1.48), за да се провери обогатяването му в апикалната мембрана, което се оказа да бъде 5 пъти в сравнение с първоначалния хомогенат.

Ензимна активност

Проучвания за усвояване на субстрата

Поглъщането на D-галактоза се определя при 37 ° С в присъствието на натриев градиент. Инкубационната среда, използвана при pH 7,4, се състои от 0,1 mM D-галактоза, 100 mM NaSCN, 100 mM манитол, 0,1 mM MgSO4, 10 mM HEPES и радиоактивен субстрат, използван като индикатор (1 mCi/ml D- [1-14 C ] галактоза; Радиохимичен център Амершам, Великобритания).

Анализ на експресията на протеин чрез Western blot

Експресията на транспортерите PEPT1 и SGLT1 във VMBC на различните експериментални групи беше измерена чрез Western blot. Пробите се разреждат в среда, съставена от 50 mM Tris-HCl, рН 6.8, 2% SDS, 10% глицерол, 5% 2-меркаптоетанол и 0.05% бромофенолно синьо. След като ги варят в продължение на три минути, те се зареждат (50 ug) върху 12% полиакриламиден гел и се разделят чрез електрофореза за 60 минути. Така отделените протеини след това се прехвърлят в нитроцелулозна мембрана (Hybond P., Amersham ? Pharmacia Biotech, Барселона) чрез електрофореза при 250 mA/100 V и 4 ° C за 2 h.

Статистически анализ

Резултатите се изразяват като средна стойност ± ESM. За статистическия анализ е използвана програмата SPSS (версия 12.0) и е приложен тестът на Kruskal Wallis със съответните сравнения a posteriori. Разликите между групите се считат за статистически значими, когато p

Развитие на животните

Включването на двата пробиотични щама в обичайната диета на животните не променя телесното им тегло, което показва, че не оказва вредно въздействие върху развитието на тези животни. Освен това не са наблюдавани разлики в измерените кръвни параметри или в теглото на различните извлечени органи (йеюнум, черен дроб, далак, панкреас и дебело черво).

Следователно можем да заключим, че приемът на Lactobacillus casei Y. Bifidobacterium bifidum това не променя нормалния растеж и развитие на тези животни, нито тяхното метаболитно състояние.

Морфология на червата

Тези факти показват, че и двата щама могат да упражняват активиращ ефект върху чревната имунна система.

Поемане на хранителни вещества и ензимна активност в VMBC

Анализиран е ефектът от добавените диети върху чревната физиология на тези животни. Както е показано на фигура 3, във всички проведени тестове за ензимна активност (захараза, малтаза и аминопептидаза N) тези дейности изглеждат повишени. В случай на активност на малтаза и аминопептидаза N, това увеличение е по-ясно при групата, хранена с Bifidobacterium че при хранените с Лактобацилус.