Криоелектронна микроскопия Подготовка на образец чрез протокол за фокусиран йонни лъчи (преведено
Обобщение
Криоелектронните микроскопи, или сканиращи (SEM), или трансмисионни (TEM), се използват широко за характеризиране на биологични проби или други материали с високо съдържание на вода 1. SEM/фокусиран йонен лъч (FIB) се използва за идентифициране на интересни характеристики в проби и извлечете тънко, прозрачно електронно фолио за прехвърляне в крио-ТЕМ.
Резюме
Въведение
FIB се използва широко за приготвяне на проби от ТЕМ за многобройните му предимства 7. Да назовем само няколко: използването на високоенергийни йони с почти нормална честота минимизира ефекта от свързаните с материала диференциални скорости на смилане; регионът, който се взема от общата проба, може да бъде избран с точност по-малка от микрона; премахва се много малко количество материал. Някои неотдавнашни технически постижения направиха възможно използването на FIB и за подготовка на проби от ТЕМ при 2,8-10 криогенни температури. Има няколко предимства пред традиционния метод за приготвяне на криомикротомия 11,12, използван главно за проби от мека материя, като липсата на механична деформация на нарязания лист, липсата на следи от ножове и възможността за приготвяне на композитни проби с твърди/меки интерфейси или компоненти.
Протокол
Забележка: Всички параметри, посочени в този протокол, са валидни за инструментите и моделите, посочени тук. Някои от тези параметри (отбелязани със * в текста) може да са различни, ако използвате друг производител или модел.
1. Прилагане на ПИБ/SEM
2. Замразяване на пробата
3. Фрезоване на йон
4. Крио трансфер към TEM
Представителни резултати
В тази работа са използвани: двулъчева FIB/SEM, оборудвана с наноманипулатор и криогенна камера; TEM с поддръжка на крио-трансфер; крио-прототипна трансферна станция. Антиконтаминаторните (AC) лопатки на крио-препаративната камера и върхът на наноманипулатора (NM) са модифицирани от Gatan. В сравнение със стандартната крио камера, изводите за променлив ток са по-големи, за да осигурят по-голям радиатор за върха на NM. Освен това климатикът е снабден със скоби за свързване на плитките Cu за топлообмен с връх NM. Гумите на FIB/SEM бяха модифицирани, за да позволят на NM да бъде и да бъде вътре, дори когато камерата за проби беше обезвъздушена. Трябва да се отбележи, че параметрите, използвани в тази работа, са най-подходящи за оборудването, споменато по-горе; Тези параметри може да са необходими за регулиране при работа с други видове оборудване. За да се работи с този протокол, трябва да се спазват нормални предпазни мерки при работа с криогенни, азотни и течни вакуумни системи.