Изследване на експресията на рецептори на прогестерон и естроген в ендометриума на овцете

Изследване на експресията на прогестеронови и естрогенни рецептори в ендометриума на овце, хранени с нормална диета и допълнена диета

Изследване на експресията на прогестеронови рецептори в ендометриума на овце-майки с нормална и допълнителна диета

*, ** Adriana Vasconcellos C.; ** Марко Паредес Х .; ** Даниела Нуньес Р .; ** Едуардо Бариентос V.; ** Йоселин Олмазабал С. и ** Хавиера Наварете V.

* Дълбочина. на фундаменталните науки Медицински факултет, Университет на Ла Фонтера, Темуко, Чили

** LIMBA, Лаборатория за биотехнологии за животни, Университет де Ла Фронтера, Чили.

КЛЮЧОВИ ДУМИ: Араукана креолски овце, репродуктивна система, хранене на овце.

КЛЮЧОВИ ДУМИ: Араукана креолска овца; Репродуктивна система; Храна за овце.

ВЪВЕДЕНИЕ

МАТЕРИАЛ И МЕТОД

Използвани са 8 овце Criolla Araucana на възраст от 2 до 4 години, отглеждани в експерименталното поле Maquehue (Регион Araucanía), които бяха разделени на две равни групи. И двете групи бяха държани на смесена ливадна основа с многогодишна райграс и бяла детелина (стандартна диета). Освен това една от групите имаше ежедневен достъп след паша до добавка с 250 g/ден овесено зърно и 30 g/ден суров протеин (допълнена диета).

Етапът на естрозния цикъл е потвърден чрез анамнеза, хистологично изследване и измерване на концентрациите на прогестерон и естроген в кръвта (данните не са показани). След жертването репродуктивната система беше отстранена, като незабавно бяха разделени двата маточни рога, единият от които беше фиксиран във воден Bouin за имунохистохимично изследване, а другият беше замразен в течен азот за екстракция на РНК.

експресията

Получаване на праймери за RE и RP усилване чрез RT-PCR в реално време. Праймерите, използвани за PCR анализ в реално време (Таблица I), са получени от овчи ER cDNA последователности, налични в базата данни GenBank, достъпна на уеб сървъра на Националния център за биотехнологична информация (http://www.ncbi.nlm. nih.gov). Праймерите, използвани за амплифициране на b-актин cDNA (Таблица I) са получени от Dzidic и др., (2004). Биоинформатичният дизайн на стартерите е извършен с програмата "Primer 3" (http://primer3.sourceforge.net/).

Имунохистохимичният анализ на естрогенните и прогестероновите рецептори в ендометриалната тъкан на възрастни овце, поддържан със и без хранителна добавка, показва съществуването на имунохистохимична реакция срещу двата рецептора и в двете групи овце (фиг. 1 и 2). Имунореактивните сигнали са особено забележими на ядрено ниво в клетките на ендометриалната жлеза и стромалните клетки, разположени в карункуларните жлезисти области на ендометриума (фиг. 1 и 2). Частична имунореакция се наблюдава и в клетките на лигавичния епител (фиг. 1А и 2А). Наблюдава се по-голямо количество имунореактивни клетки, както и по-голяма интензивност на марката на двата рецептора в ендометриалната тъкан на овце с добавки в сравнение с тези, които са били хранени със стандартна диета (Фиг. 1 и 2). Преписът на RP и ER е открит в обща РНК, извлечена от ендометриума на овце, хранени със стандартна диета, както и с допълнена диета (Фиг. 3).

Фиг. 1. Имунохистохимична експресия на ER в ендометриума на овце с недопълнена диета (A и C) и допълнена (B и D). Откроява се имунореакцията в стромалните клетки (А и В) и в жлезистия епител (С и D) (дебела стрелка). Също така е посочена (тънка стрелка) липса на имунореактивност в ендометриалния епител и някои клетки на жлезистия епител. Фигура 1 A и 1 B (400X), Фигура 1 C и 1D (1000X).