Инхибира; n експериментален растеж на аневризми a; коремна арматика с помощта на гъба

Вижте статиите и съдържанието, публикувани в този носител, както и електронните резюмета на научни списания към момента на публикуване

Бъдете информирани по всяко време благодарение на сигнали и новини

Достъп до ексклузивни промоции за абонаменти, стартиране и акредитирани курсове

Следвай ни в:

Въведение
Материали и методи
Резултати
Дискусия

Въведение
Материали и методи
Приготвяне на ebhg със или без bfgf
Експериментални животни
Индукция на експериментален ааа
Групи за лечение
Хистологичен анализ
Статистически анализ
Резултати
Промени в деня в 5-те групи
Хистологичен анализ
Дискусия
Библиография

Аневризма на коремната аорта (AAA) е често срещано и животозастрашаващо разстройство, характеризиращо се с дисбаланс между разрушаване и синтез на извънклетъчния матрикс на аортната стена. Образуването на аневризма е свързано с хронично трансмурално възпаление, изчерпване на популацията на гладките мускулни клетки (SMC) и прекомерно производство на металопротеиназна матрица (MMP), което причинява необичайно разграждане на еластин и колаген 1, две. Стандартното лечение на ААА е хирургична корекция чрез поставяне на съдови импланти, както и ендоваскуларно възстановяване на аневризмата, всички с цел предотвратяване на леталното разкъсване на ААА. Все още обаче няма ефективно медицинско лечение за стабилизиране на аневризмалната патология и предотвратяване на по-нататъшно разширяване или разкъсване.

В описаното тук изследване ние лекувахме плъхове с експериментална AAA, като използвахме гъба с желатинов хидрогел (EBHG) или EBHG с включен bFGF, за да изследваме ефектите от тези лечения върху развитието на експерименталната AAA.

Материали и методи Приготвяне на EBHG със или без bFGF

Рекомбинантен човешки bFGF с изоелектрична точка 9,6 се доставя от Kaken Pharmaceutical (Токио, Япония). EBHG се приготвя, както е описано по-рано 13. EBHG се получава чрез омрежване на киселинен желатин с изоелектрична точка 4.9. Той беше хвърлен в лист (15 х 7 х 2 мм) и лиофилизиран. Преди да се постави EBHG върху аортата, лиофилизираният EBHG се накисва с воден разтвор със или без bFGF за 1 h, за да се получи EBHG съответно със или без bFGF. Този лист от желатинова гъба е проектиран да се разгражда за 2 седмици.

Експериментални животни

Мъжки плъхове Sprague-Dawley (250-400 g) са получени от CLEA (Токио, Япония) и са използвани за експериментите. Това проучване е разрешено от Комитета за грижа за животните към Медицинския факултет на университета Тохоку. Грижите за животните са били в съответствие с разпоредбите на Ръководството за грижа и използване на лабораторни животни (Национален съвет за изследвания, Вашингтон, DC, 1996).

Индукция на експериментална AAA

Плъховете се анестезират с i.p. инжекция. на натриев пентобарбитал (50-60 mg/kg телесно тегло: Dainippon Pharmaceutical, Осака, Япония), и лапаротомия по средна линия се извършва при стерилни условия. Изолиран е 1 см сегмент на инфрареналната аорта и всички лумбални артерии са лигирани. Външният диаметър на аортата беше измерен преди инфузия на еластаза (DA инфузия) с помощта на дигитален шублер (Mitutoyo, Kanagawa, Япония). Полиетиленов катетър (Becton Dickinson, Sparks, MD) беше вкаран в дясната външна илиачна артерия и придвижен към изолираната аорта. В проксималната аорта е поставена атравматична скоба и е направено временно лигиране над дисталната аорта, за да се фиксира сондата. Изолираната аорта се влива с 2,7 единици свинска панкреатична еластаза тип I (E-1250, партида 84K7700; Sigma, Сейнт Луис, Мисури) в продължение на 60 минути с помощта на инжекционна помпа (TOP-5200; TOP, Токио, Япония). След вливане на еластазата, лигирането и сондата бяха отстранени, лигирайки дясната външна илиачна артерия. Ретроперитонеумът и коремната стена бяха затворени. Плъховете бяха преразгледани на 14-ия ден след интервенцията (14 DPI) и беше измерен максималният DA.

Групи за лечение

Експерименталните плъхове с инфузия на еластаза бяха разделени на случаен принцип в 5 групи според леченията: група без лечение (нетретирана група, n = 10), група, третирана с EBHG с включена дестилирана вода (група EBHG, n = 10), 3 групи с EBHG с различни включени количества bFGF (група EBHG + 100 ng, група EBHG + 1 μg и група EBHG + 10 μg; n = 10, 6 и 6, съответно). Тези EBHGs бяха поставени върху аортите на плъхове, напоени с еластаза, и ретроперитонеумът беше затворен.

Проведена е хистологична оценка на 3 групи плъхове, включително нелекуваната група, групата само с EBHG и групата с EBHG '100 ng (n = 6, съответно). Плъховете бяха умъртвени на 14-ия ден след интервенцията; 4% разтвор на параформалдехид във фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS) се перфузира в продължение на 5 минути през лявата камера и отстранените аорти се фиксират отново с 4% разтвор на параформалдехид в PBS за 2 часа, последван от 100% етанол. Образците бяха вградени в парафин и бяха получени 5 μm хистологични срезове, които бяха оцветени с петно Verhoeff-van Gieson (VVG) за еластични влакна и подготвени за тяхното имунохистохимично изследване. Съотношението на оцветените еластични влакна/площ на средната стойност при VVG оцветяване беше изчислено с помощта на софтуера Image-J (NIH, Bethesda, MD).

Имунохистохимичното проучване е проведено след депарафинизация и рехидратация. Секциите бяха третирани в продължение на 10 минути с H202, за да се блокира ендогенната пероксидазна активност. След блокиране с 1% говежди серумен албумин в PBS в продължение на 30 минути, хистологичните срези бяха инкубирани с първично антитяло за една нощ при 4 ° C, включително миши моноклонално антитяло срещу α-гладкомускулен актин (α -SMA) човек (Sigma) за оцветяване на CML на плъх и заешко антитяло към bFGF на плъх (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Впоследствие се извършва инкубация с биотинилирано вторично антитяло и авидин-биотинов комплекс (Dako Cytomation, Glostrup, Дания) съгласно протокола на производителя. Хистологичните разрези бяха оцветени с хематоксилин. Проведени са експерименти с отрицателен контрол чрез заместване на първичното антитяло с неспецифичен миши или заешки имуноглобулин G. Медиалната CML плътност се определя чрез усредняване на α-SMA положителни клетки в 8 полета с висока мощност, избрани от 2 хистологични секции.