Лявата пневмонектомия, комбинирана с Monocrotaline или Sugen като модел на белодробна хипертония в

Обобщение

Пневмонектомията на левия гризач е ценна техника за изследване на белодробна хипертония. Тук представяме протокол за описание на процедурата за пневмонектомия на плъхове и следоперативни грижи за минимална заболеваемост и смъртност.

лявата

Резюме

Въведение

Белодробната артериална хипертония (БАХ) е прогресиращо и фатално заболяване, характеризиращо се с повишен белодробен кръвоток, повишено съдово съпротивление, възпаление и ремоделиране на малки белодробни кръвоносни съдове. Това ремоделиране обикновено води до съдови лезии, които запушват и изтриват малки белодробни артерии, причинявайки вазоконстрикция и увеличено допълнително натоварване на дясната камера 2. Има някои успешни фармакологични лечения на БАХ; в резултат на това PAH остава с висока смъртност. Напоследък фокусът на изследванията в патобиологията на белодробната хипертония се насочи към механизъм, при който ролята на увеличения белодробен кръвен поток се счита за важен фактор в развитието на белодробно съдово ангиопролиферационно ремоделиране 3, 4 .

Новостта на този ръкопис е представена в много подробния и пълен хирургичен протокол за лява пневмонектомия при плъхове и в обсъждането на техническите и физиологичните предизвикателства на тези модели. Тъй като в момента този протокол не е наличен, много изследователи смятат, че моделът е твърде труден. Изследователите, извършили лява пневмонектомия, са изправени пред висока смъртност и заболеваемост, свързани с ненужна загуба на животни, което компрометира научната оценка. Вместо това, много хора използват класически модели като MCT инжекция, хронична хипоксия или пневмонектомия, за да създадат PAH. Тези модели обаче са много по-малко ефективни от комбинацията на MCT или Sugen с лява пневмонектомия. Основната цел на тази статия е да предостави първия подробен и възпроизводим хирургичен протокол за едностранна лява пневмонектомия при плъхове и да осигури най-добрия хирургичен модел на ПАХ. Комбинирането на този протокол за лява едностранна пневмонектомия с MCT или SU5416 ще позволи на изследователите да създадат много по-ефективен и клинично значим модел на тежка PAH за изследване на патогенезата на това фатално заболяване.

Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.

Протокол

Процедурите, описани по-долу, са одобрени от Институционалния комитет за грижи и употреба на животните (IACUC) към Медицинското училище Icahn в планината Синай. Всички плъхове, получили хуманни грижи, отговарят на планината Синай "Ръководство за грижа и използване на лабораторни животни".

1. подготовка за операция

  1. Cooley-Mayo автоклавни извити ножици (големи ножици), прави ножици Iris (малки ножици), Vannas McPherson Iris ножици (задни ножици), тъканни форцепс Wangensteen (атравматични форцепс), Gerald тъканни форцепс, обикновен телен спекулум (самосъхраняващо се прибиращо устройство), припалител за малки съдове, марлени подложки, двойна сонда, фин държач на съдови игла и хемостатичен форцепс от комари Jacobson Micro (комар).

2. подготовка и интубация на плъхове

3. стерилна подготовка на околната среда

  1. Визуализирайте хирургичната област под микроскоп. Това трябва да се направи първо, защото микроскопът не може да се регулира, след като средата е стерилна.
  2. Сложете стерилни хирургически ръкавици. Не докосвайте нищо друго освен стерилни инструменти, хирургически завеси и хирургичната област на тялото на плъха!.
  3. Поставете стерилна завеса върху тялото на плъха и върху таблата за инструменти, за да създадете стерилна среда.
  4. Носете стерилни ръкавици, поставете стерилни инструменти върху стерилната тава за инструменти.

4. Лява хирургична процедура Пневмонектомия

5. следоперативно възстановяване

  1. Поставете животното в гръдна позиция. Изключете изофлурана, но продължете да давате на плъха кислород през ендотрахеалната тръба. Не оставяйте животното без надзор по всяко време, докато не сте дошли в достатъчно съзнание за разходка и животното в клетката му.
  2. Администрирайте 2-3 ml стерилен затоплен разтвор на Рингер подкожно.
  3. Следете сърдечната честота (≈200 - 500 удара в минута), насищането с кислород (≥95%) и животинския цвят, за да потвърдите, че животното диша добре.
  4. Когато животното започне да прави спонтанни дихателни движения и движения на врата и реагира на физически стимули (като разширяване на очите, движение на носа и ушите в отговор на звука), екстубирайте животното, като издърпате тръбата и изключете вентилатора.
  5. Върнете животните в празна клетка, в компанията на други животни. Животното трябва да бъде само за поне 3 дни.
  6. За да контролирате болката, прилагайте бупренорфин 0,1 mg/kg подкожно на всеки 12 часа в продължение на 3 дни.

6. MCT или „Втора стачка“ или администрация на Sugen

  1. Прилагайте 1 ml MCT (60 mg/kg) или 1 ml Sugen (25 mg/kg) подкожно, една седмица след операцията.

7. терминал за прибиране на реколтата

Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.

Представителни резултати

Според приетата система за класификация, белодробната хипертония се характеризира със средно налягане в белодробната артерия (MAPP), по-голямо от горните граници на нормалното налягане в белодробната артерия (т.е. 25 mm Hg). В групата с пневмонектомия + MCT, тежка БАХ се развива до ден 21 с по-висок РАРМ (Фигура 1). MPAP се изчислява по формулата: